P120及NF-κB在脂多糖致小鼠急性肺损伤气道上皮中的表达变化及相关机制

发布时间：2018-03-15 00:21

  本文选题：p120　切入点：NF-κB　出处：《华中科技大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：一、实验目的 本实验使用脂多糖（LPS）气管内注射建立小鼠急性肺损伤模型（ALI），检测在气道损伤修复过程中p120蛋白的表达变化及在细胞内的定位、NF-κB信号通路相关蛋白的表达变化及细胞因子IL-8的表达变化，初步探讨小鼠气道炎症发生过程中的有关机制。 二、实验方法 C57小鼠随机分为实验组1d、4d、7d、14d组和对照组，每组8只。实验组经气管内注射LPS（5mg/kg），对照组气管内注射等量生理盐水，分别于注射后1d、4d、7d及14d取肺组织。采用HE染色观察各组小鼠的气道上皮形态学变化；免疫组织化学方法检测p120在气道上皮细胞的表达及在细胞内的定位；Westernblot方法分别检测小鼠肺组织内p120、NF-κB亚基p65、p-IκBα及IκBα等表达水平的变化；ELISA（定量酶联免疫吸附实验）检测小鼠肺组织匀浆上清液中NF-κB信号通路下游靶基因之一细胞因子IL-8的表达变化。 三、实验结果 1、HE染色显示：对照组小鼠支气管黏膜上皮细胞排列整齐，未见明显损伤及修复性变化。实验组小鼠气道上皮呈现了损伤及损伤后增殖、修复的形态学变化。实验1d组小鼠未出现明显的急性炎症变化，气道上皮连续性较好，肺泡也无明显的病理变化。实验4d组小鼠气道黏膜上皮细胞出现明显的坏死、脱落，细支气管腔内及管壁周围见多量炎症细胞浸润，肺泡间隔明显增宽，支气管旁血管扩张、充血，血管周围见多量炎症细胞渗出。实验7d组小鼠支气管壁周围仍见较多炎症细胞浸润，但部分区域肺泡间隔较前有所恢复。实验14d组小鼠细支气管壁炎细胞浸润减少，肺泡间隔基本恢复正常，部分区域细支气管黏膜上皮细胞排列紧密，上皮层次稍增多，呈现增殖变化。 2、免疫组化染色显示：p120在对照组小鼠气道上皮呈现围绕气道上皮细胞连续棕黄色线状表达，在实验组小鼠气道上皮的细胞膜表达呈现先减少后逐渐恢复趋势。实验1d组，p120仍表现为沿气道上皮细胞膜呈棕黄色连续线状表达；实验4d组和7d组，p120在小鼠气道上皮细胞膜上表达明显减少，部分区域见细胞质内表达；实验14d组，部分区域恢复p120在小鼠气道上皮细胞膜上棕黄色连续线状表达。各实验组与对照组相比均有明显的差异（p＜0.05）。 3、Westernblot检测显示： 1）与对照组小鼠肺组织内p120表达水平相比较，实验组小鼠肺组织内p120蛋白水平呈现出先降低后逐渐恢复的趋势，实验1d组和4d组p120蛋白水平下降较明显，7d组和14d组p120蛋白水平有所上升，但仍低于对照组。各实验组与对照组之间p120蛋白水平差异具有统计学意义（p＜0.05)。 2）与对照组小鼠肺组织内NF-κB表达水平比较，实验组小鼠肺组织内NF-κB表达呈现出先增加、后逐渐降低的动态变化，其表达变化的趋势与p120的变化趋势相反，即实验1d组和4d组NF-κB表达增加，7d组和14d组NF-κB表达逐渐降低至接近对照组水平。实验1d组、4d组和7d组与对照组比较NF-κB表达差异明显，具有统计学意义（p＜0.05）；实验14d组与对照组比较差异无统计学意义。 3）与对照组比较，小鼠肺组织内p-IκBα呈现先增加后减少趋势，IκBα则先因磷酸化增加而表达减少，，后因磷酸化降低而表达增加。实验1d组、4d组及7d组与对照组之间差异明显，具有统计学意义（p＜0.05），实验14d组与对照组之间差异无统计学意义。 4、ELSIA结果显示：LPS刺激C57小鼠后，IL-8的表达水平先增加后降低。各实验组与对照组表达水平差异明显，具有统计学意义（p＜0.05）。 四、实验结论 由LPS所致的小鼠ALI，可能通过下调气道上皮细胞内p120表达并致其发生细胞内定位的改变，引起IκBα发生磷酸化并降解，从而活化NF-κB信号途径，促进前炎症因子IL-8等的生成与分泌，参与气道炎症反应和增生修复过程。
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【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R563.8

【参考文献】

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1 朱敏;马燕;李娜萍;李建莎;汪永平;王满香;王芳;吴人亮;;GSK3β在几种气道上皮损伤模型中的表达[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2007年03期

本文编号：1613609