耐多药肺结核患者外周血调节性T细胞的表达及功能研究

发布时间：2018-03-24 08:28

  本文选题：调节性T细胞　切入点：耐多药结核　出处：《南京医科大学》2015年博士论文

【摘要】：背景结核病(tuberculosis,TB)是由结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的全球范围内的高感染率、高致死率的慢性传染病。尽管卡介苗(BCG)疫苗普遍应用和化疗药物有效性不断提高,但由于耐药性等问题的存在,结核病特别是耐多药结核(multiple drug resistant tuberculosis,MDR-TB)仍然严重威胁着人类的健康并给全球带来沉重的经济负担。MDR-TB是指结核病患者感染的结核分枝杆菌至少同时对异烟肼和利福平耐药。结核病的发病不仅与结核杆菌的数量、毒力有关,而且与宿主机体的免疫状态密切相关。细胞免疫(cell mediated immunity,CMI)是调节宿主和结核分枝杆菌相互作用的核心,CD4~+T细胞是介导细胞免疫反应的主要细胞,可以在不同细胞因子及环境因素作用下分化为Th1、Th2、Th17和Treg四种亚群,各细胞亚群之间可以互相转化,从而使机体的免疫效应和免疫抑制处于精细而复杂的平衡状态。结核病患者常存在Thl细胞免疫功能低下及Thl/Th2免疫应答失衡。调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)是一种具有免疫调节功能的T淋巴细胞,可通过产生IL-10、TGF-β等抑制性细胞因子,或依赖于细胞-细胞接触的机制,抑制效应性T细胞的活化、增殖及细胞因子的分泌。在慢性感染中,其关键作用在于调控病原体诱导的有效T细胞应答与导致严重炎症及组织破坏的过度T细胞反应之间的平衡,即调节抗感染免疫与免疫病理损害之间的平衡。基于Treg细胞的免疫抑制特性,多种病原体均能诱导宿主产生Treg细胞,利于病原体免疫逃避从而维持慢性感染。CD4~+CD25~+Treg细胞是目前研究较为深入的Treg细胞,但有关CD4~+CD25~+Treg细胞在MDR-TB患者体内的变化的研究鲜有报道。本研究着眼于Treg细胞,通过流式细胞技术、细胞共培养等实验方法,检测MDR-TB患者外周血Treg细胞的表达情况及功能状态,检测Treg细胞的表型改变,从负性共刺激受体分子介导的信号通路着手,进一步分析MDR-TB患者Treg细胞表达升高的原因,旨在阐明维持结核感染中的保护性免疫和病理损伤之间的平衡的机制,为临床免疫辅助治疗提供理论依据。第一部分耐多药肺结核患者外周血调节性T细胞的表达方法:选择20例药物敏感性肺结核患者(S-TB组)、18例MDR-TB患者和20例健康对照者(HC组),采用ELISA法检测外周血主要抑制性细胞因子IL-10、TGF-β含量;采用CD4~+CD25~+Foxp3~+、CD4~+CD25~+CD127~-两种方法标记Treg细胞,流式细胞技术观察外周血Treg细胞的表达,并进行相关性分析。结果:MDR-TB患者和S-TB患者外周血IL-10、TGF-β水平显著高于健康对照者(p0.05),且MDR-TB患者血清IL-10、TGF-β水平高于S-TB组(p0.05);MDR-TB组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+、CD4~+CD25~+CD127~-T细胞比例均显著高于S-TB组(p0.05),且CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞比例与CD4~+CD25~+CD127~-T细胞比例呈正相关(p0.05);MDR-TB组IL-10、TGF-β水平与CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例正相关。结论:Treg细胞至少部分通过产生IL-10、TGF-β发挥免疫抑制效应;TB患者免疫功能受损程度与Treg细胞水平有关,且MDR-TB患者免疫功能损害程度更重;Treg细胞的持留与MDR-TB的发生发展密切相关。第二部分肺结核患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的功能分析方法:采用免疫磁珠法分离TB患者外周血CD4~+CD25~+Treg细胞和CD4~+CD25~-效应性T细胞,采用CFSE法检测CD4~+CD25~+Treg细胞对CD4~+CD25~-效应性T细胞的抑制功能;去除外周血中CD4~+CD25~+Treg细胞,ELISA法测定BCG刺激下PBMCs中细胞因子IFN-γ的水平。结果:S-TB、MDR-TB患者外周血淋巴细胞来源的CD4~+CD25~+Treg细胞具有免疫调节功能,可有效抑制同源性CD4~+CD25~-效应性T细胞的增殖,且CD4~+CD25~-T细胞的增殖反应随CD4~+CD25~+Treg细胞数量增多而降低;去除实验显示,去除外周血中CD4~+CD25~+Treg细胞后,BCG刺激下S-TB、MDR-TB患者PBMCs中细胞因子IFN-γ的水平显著增加,表明TB患者的CD4~+CD25~+Treg细胞可有效抑制IFN-γ的生成。结论:CD4~+CD25~+Treg细胞通过抑制Thl细胞增殖,导致Thl细胞因子如IFN-γ分泌的减少,从而削弱机体免疫系统对感染结核分枝杆菌的清除。第三部分肺结核患者外周Treg细胞表面共刺激受体分子CTLA-4、PD-1和ICOS的表达及与疾病关系的探讨方法:采用流式细胞技术检测TB患者和正常对照外周血中Treg细胞表面CTLA-4、PD-1、ICOS分子的表达,比较S-TB患者和MDR-TB患者之间表达的差异,分析其与Treg比率的相关性;免疫磁珠法去除TB患者PBMC中的Treg细胞,应用PD-1功能性抗体拮抗PD-1信号通路,检测分析BCG刺激后PBMC中Treg细胞的比例。结果:肺结核患者外周Treg细胞CTLA-4、PD-1、ICOS的表达显著高于正常对照(p0.05),且CTLA-4、PD-1的上调在MDR-TB患者较S-TB患者更明显(p0.05);相关分析显示,CTLA-4、PD-1、ICOS表达与Foxp3的表达正相关(p0.05);拮抗PD-1信号通路,可显著抑制TB患者BCG诱导的Treg细胞的活化增殖。结论:CTLA-4、PD-1、ICOS分子在TB,尤其是MDR-TB中的重要作用,以及对Treg细胞的调控,使得对相关信号通路的调节有可能成为未来TB治疗的靶标。总结Treg细胞在结核患者特别是MDR-TB患者外周血中的表达明显升高,且具有有效的免疫抑制功能。细胞表面负性共刺激受体分子表达的改变可能促进Treg细胞的增殖。Treg细胞通过对机体免疫力的调节而参与MDR-TB的发生发展,并影响疾病的转归与预后。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R521

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 丁志山，，沃兴德;细胞调亡与动脉粥样硬化[J];中国动脉硬化杂志;1998年01期

2 李妍;纪朋艳;张巍;彭顺利;吕士杰;;柴胡皂苷d对SH-SY5Y细胞ERK蛋白表达及凋亡的影响[J];中国医科大学学报;2013年12期

3 严银芳,陈晓,杨小清,闫远芳;流行性腮腺炎病毒减毒株S_(79)在几株肿瘤细胞和正常细胞中增殖的比较研究[J];肿瘤;2003年06期

4 刘功让;管培中;宋淑亮;逯素梅;冯玉新;辛华;;绞股蓝多糖对四氯化碳损伤HepG2细胞的保护作用[J];山东医药;2007年31期

5 肖东杰,汪运山;B细胞被动凋亡的研究进展[J];国外医学(临床生物化学与检验学分册);1998年05期

6 张运涛,刘凡,姜茹,谷仲平,汪涌,张顺,刘荣福,李玉梅;外源性p27与GRC-1细胞端粒酶活性及细胞凋亡关系的实验研究[J];中国现代医学杂志;2002年09期

7 石和元;王平;胡永年;邱幸凡;田代志;;温胆汤改良方对Aβ_(25-35)诱导AD细胞模型bcl-2、bax蛋白表达的影响[J];世界科学技术;2005年06期

8 孟威宏;王强;王虹蛟;颜炜群;;牛胰蛋白酶抑制剂研究进展[J];国外医学(老年医学分册);2008年04期

9 钟民涛;王晓丽;李星云;刘磊;刘颖丽;张伟;黄敏;;香菇C91-3菌丝发酵蛋白对H22肿瘤细胞体内外抗肿瘤机制的初探[J];中国微生态学杂志;2011年09期

10 张晨,黄世林,马东初,孙英慧,马小锋;硫化砷诱导NB_4细胞调亡[J];白血病;2000年06期

相关会议论文 前10条

1 邹萍;;血液系统恶性肿瘤细胞来源膜微粒的特征及生物学作用研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

2 蒋争凡;卞婕;翟中和;;非细胞体系诱导小鼠肝细胞核凋亡的超微观察[A];第十次全国电子显微学会议论文集（Ⅰ）[C];1998年

3 陈卫银;祝彼得;刘福友;冯雪梅;;参芎滴丸对急性脑梗死模型大鼠神经细胞调亡的影响[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年

4 谢晶日;李威;梁国英;杨丰源;;胃灵颗粒对胃癌前病变细胞调亡基因影响的实验研究[A];中华中医药学会脾胃病分会第十八次学术交流会论文汇编[C];2006年

5 綦淑芬;万瑞香;姚如勇;;扇贝多肽对Hela细胞在紫外线损伤下的保护作用[A];第五届全国自由基生物学与自由基医学学术讨论会论文摘要汇编[C];2000年

6 吴李君;裴蓓;王顺昌;王军;汤明礼;;砷和镉暴露诱导秀丽小杆线虫生殖腺细胞调亡及其信号通路研究[A];中国毒理学会第二届全国中青年学者科技论坛会议论文集[C];2007年

7 余珂;王敬贤;周炳升;;多溴联苯醚诱导人神经SK-N-SH细胞调亡的机理[A];湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第八届第十七次学术年会论文汇编[C];2007年

8 冉新泽;郑怀恩;王艾平;王锋超;韩京;;他汀对内皮细胞辐射损伤组织因子与细胞调亡的影响[A];中国毒理学会放射毒理专业委员会第七次、中国毒理学会免疫毒理专业委员会第五次、中国环境诱变剂学会致突专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致畸专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致癌专业委员会第二次全国学术会议论文汇编[C];2008年

9 崔承彬;闫少羽;蔡兵;赵庆春;姚新生;曲戈霞;;黑果黄皮Clausena dunniana Levl中咔唑生物碱类新细胞周期抑制剂及细胞调亡诱导剂的核磁共振研究[A];第十一届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];2000年

10 吴耀辉;邹萍;;Sunrivin基因沉默对K562细胞调亡影响的研究[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

相关重要报纸文章 前1条

1 张田勘;细胞调亡的意义[N];中国人口报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 罗晓明;载药聚合物超细纤维作为肿瘤局部制剂的研究[D];西南交通大学;2014年

2 王石;黄芪甲苷促进血管新生的分子机制研究[D];南京中医药大学;2013年

3 宋杨;抗CD25单抗对肾移植患者调节性T细胞生存和功能改变影响的研究[D];复旦大学;2014年

4 罗忠光;CRL E3泛素连接酶靶向新药MLN4924在体内外杀伤肝癌细胞的作用及机制研究[D];复旦大学;2014年

5 肖林林;巨噬细胞对血管细胞的辐射旁效应及其分子机制研究[D];复旦大学;2014年

6 张峰;戊型肝炎病毒基因4型在PLC/PRF/5细胞中的培养及其特征研究[D];北京协和医学院;2014年

7 陈凤华;Tat-SmacN7融合肽对肿瘤细胞辐射增敏作用的研究[D];北京协和医学院;2013年

8 虞志新;Th17/Treg失衡及其与中性粒细胞相互影响在ARDS发病中的作用和机制研究[D];江苏大学;2015年

9 黄凌燕;STK33基因在下咽鳞状细胞癌发生发展中的作用机制研究[D];山东大学;2015年

10 袁媛;let-7c介导c-Myc基因调控逆转肝癌细胞多药耐药的机制研究[D];兰州大学;2015年

相关硕士学位论文 前10条

1 王帅帅;Marc-145细胞中猪繁殖与呼吸综合症病毒粒子与胞外体的分离与鉴定[D];山西农业大学;2015年

2 杜文娟;NK-lysin通过Wnt/β-catenin信号通路抑制肝癌细胞侵袭与转移的研究[D];山西农业大学;2015年

3 张晓娇;天然抗氧化剂对乳腺癌MCF-7/ADM细胞的耐药逆转作用及机制研究[D];河北联合大学;2014年

4 吕超绍;重组人干扰素γ(rhIFN-γ)对白血病K562细胞免疫逃逸的影响[D];昆明理工大学;2015年

5 汪建阳;Ang-(1-7)通过G蛋白偶联受体Mas对人肝癌HepG2细胞的影响研究[D];广西医科大学;2015年

6 任志涛;小檗碱对TGF-β1诱导A549细胞上皮间质转化和MRC-5细胞转分化及细胞信号通路相关蛋白的影响[D];北京协和医学院;2015年

7 杨晓姗;重组人p66Shc腺病毒和赖氨藤黄酸盐对肿瘤细胞的抑制作用及机制[D];北京协和医学院;2015年

8 万爱英;大分割照射生物效应实测数据与LQ公式计算数据的比较研究[D];北京协和医学院;2015年

9 邢晓萌;白藜芦醇对肺癌A549细胞的放射增敏作用及其机制研究[D];北京协和医学院;2015年

10 曹曰针;胞外泛素对Treg细胞免疫抑制活性的影响[D];复旦大学;2014年

本文编号：1657501