肺特异VEGF抑制对肺发育和肺功能的影响

发布时间：2018-03-27 23:26

  本文选题：VEGF　切入点：VEGFR-1　出处：《东北师范大学》2017年硕士论文

【摘要】：VEGF属于血管内皮生长因子家族,VEGF与VEGFR-1和VEGFR-2相结合发挥生物学作用,VEGF调控内皮细胞分化、增殖,并且调节血管生成,具有血管渗漏活性。肺脏是血管分布最多的器官之一,在肺脏的发育及成熟过程中VEGF发挥重要的作用。因此本文建立了肺特异性抑制VEGF的小鼠模型(phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO小鼠),利用饲喂强力霉素,可逆、肺特异抑制vegf基因的转录,对小鼠肺发育、肺结构及肺功能的调节作用进行了系统研究。实验分两组进行,即正在发育小鼠和成熟小鼠组,每组又分为饲喂四环素食料的转基因组和野生型对照鼠组。经过一段时间的加药处理,通过实时定量PCR检测了phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO成熟小鼠肺组织rtTR基因和vegf基因以及未成熟鼠肺vegf基因mRNA相对表达水平,其表达量(CT值)如下:成熟鼠rtTR基因循环数为tg(tg/+):22.05±0.14,wt(+/+):25.86±0.03,P(0.028)0.05,转基因鼠rtTR基因相对表达量为野生型的11.02倍,表达显著,但在肾脏组织中与野生型没有区别。成熟鼠肺vegf基因循环数为tg(tg/+)1:23.79±0.02,tg(tg/+)2:22.47±0.036,wt(+/+):21.93±0.006,P1(0.004)0.01,P2(0.005)0.01,转基因鼠vegf基因相对表达量分别为野生型的27%和51%,转基因鼠vegf基因表达抑制效果极显著。未成熟鼠肺vegf基因循环数为tg(tg/+)1:22.01±0.085,tg(tg/+)2:21.86±0.071,wt(+/+):21.6±0.02,P1(0.055)0.05,P2(0.176)0.05,转基因鼠vegf基因相对表达量分别为野生型的85%和81%,虽对vegf的表达抑制效果没有成鼠肺显著,但vegf相对表达水平仍有所下降。此外western blot结果显示肺组织VEGF蛋白表达量降低,由此可知我们的phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO小鼠的确能够肺特异性抑制VEGF来模拟肺组织VEGF异常表达的生理状态。在肺脏VEGF表达下调后,我们Real time PCR检测了mRNA相对表达量,结果如下:成熟鼠肺中vegfr-1的循环数为tg(tg/+)1:24.41±0.178,tg(tg/+)2:24.98±0.004,wt(+/+):24.15±0.06,P1(0.462)0.05,P2(0.043)0.05,转基因鼠vegfr-1的相对表达量分别为野生型的90%和73%,随VEGF的下调vegfr-1的表达也下降,但下降程度存在个体差异。vegfr-2表达未受影响。Sp-c的循环数为tg(tg/+)1:18.89±0.018,tg(tg/+)2:16.63±0.012,wt(+/+):15.8±0.113,P1(0.027)0.05,P2(0.077)0.05,转基因鼠Sp-c相对表达量分别为野生型的10%和38%,Sp-c基因的表达受VEGF表达下调的影响,表达量下降程度存在个体差异。而未成熟鼠肺中vegfr-1表达量不受影响,vegfr-2循环数为tg(tg/+):24.43±0.025,wt(+/+):23.95±0.022,P(0.004)0.05,转基因鼠vegfr-2相对表达量为野生型的85%,表达显著下降。未成熟鼠肺Sp-c表达量并未受VEGF下调的影响。我们对phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO鼠的肺组织结构进行了分析(HE染色),结果发现与野生型相比,转基因鼠VEGF受到抑制之后成熟鼠肺肺泡化程度不完全,肺间质细胞增多,肺泡隔膜变厚,肺泡腔变大。肺支气管上皮细胞同样受影响,VEGF表达下降后支气管上皮细胞排布不整齐,气管绒毛变短,这些结果表明VEGF促进成熟鼠肺结构的形成和维持。与此相反,VEGF限制未成熟鼠肺的发育。结果发现与野生型相比,转基因鼠肺VEGF抑制之后反而会促进其肺泡化,肺泡隔膜变薄,气管分支完全。另外支气管上皮细胞分布变均匀,气管绒毛变短,血管肌肉层变厚。此外我们还检测了phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO鼠的呼吸速率,发现肺特异性抑制VEGF之后小鼠呼吸变短促,提高呼吸频率和呼吸速率,消耗单位体积空气所用时间变短,这说明VEGF对小鼠肺脏呼吸功能也具有影响。结论:(1)小鼠肺特异抑制VEGF后导致肺组织形态结构、功能发生变化,这表明VEGF对小鼠肺脏发育及成熟具有重要的作用,其作用随肺脏的发育阶段不同而有所不同,因此在一些疾病的诊断中可通过检测VEGF表达水平来进行预后。(2)VEGF调控的呼吸作用,抑制VEGF会使小鼠呼吸短促,呼吸频率增加,增加呼吸速率,因此VEGF与呼吸性炎症的发生有关联。
[Abstract]:VEGF belongs to the vascular endothelial growth factor family, VEGF and VEGFR-1 combination of VEGFR-2 and its biological effects, regulation of endothelial cell differentiation, proliferation of VEGF, and the regulation of angiogenesis, vascular leakage has activity. The lung is one of the organs most vascular distribution, in the development and maturation of lung in VEGF play an important role. It is established in this paper. A mouse model of lung specific inhibition of VEGF (phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO mice), by feeding doxycycline, reversible suppression of VEGF gene transcription in mouse lung specific lung development, regulation of lung structure and lung function were studied. The experiments were divided into two groups, namely developing mice and adult mice group, each group was divided into transgenic food fed tetracycline and wild type control mice group. After drug treatment for a period of time, through real-time quantitative PCR detection of phSPC-rtTRtg/+/VEGFte tO/tetO鎴愮啛灏忛紶鑲虹粍缁噐tTR鍩哄洜鍜寁egf鍩哄洜浠ュ強鏈�鎴愮啛榧犺偤vegf鍩哄洜mRNA鐩稿�硅〃杈炬按骞�,鍏惰〃杈鹃噺(CT鍊，

本文编号：1673741