TRB3表达变化通过MAPK信号通路对肺间质纤维化的影响

发布时间：2018-04-11 12:17

  本文选题：TRB3 + MAPK信号通路　； 参考：《青岛大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的1.探讨TRB3在C57BL/6小鼠纤维化中的作用。2.外源性调控TRB3对博来霉素诱导的C57BL/6小鼠肺间质纤维化的影响,进一步在MAPK信号通路中探讨三者之间的关系。方法1.实验分组:(1)单纯对照组+生理盐水(Mock组,对照组)(2)纤维化组+生理盐水(fibrosis control组,F组)(3)纤维化+GFP组(F+GFP组)(4)纤维化+Ad-TRB3过表达组(F+TRB3组)(5)纤维化+Ad-TRB3-sh RNA干扰组(F+sh-TRB3组)。2.动物造模:博来霉素3.5mg/kg气管注入,造模次日,进行腺病毒尾静脉注射,分别于第7、14和28天处死实验小鼠一批,收集BALF、肺组织标本供实验用。3.肺组织HE/Masson染色形态学观察及纤维化评分,进行羟脯氨酸测定进一步明确胶原蛋白含量。ELASIA检测肺组织中CollaⅠ/Ⅲ的表达。免疫组化明确间质及上皮相关蛋白的表达。对肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类及计数。4.用Western blot方法从蛋白水平检测C57BL/6小鼠TRB3、p-ERK1/2、ERK1/2、p-p38MAPK、p38MAPK及EMT相关蛋白(如E-cadherin、Fibronectin、Vimentin、α-SMA)的表达情况;用RT-q PCR从m RNA水平检测TRB3、pro CollaⅠ/Ⅲ的表达。结果1.成功地构建出博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型。2.肺组织HE/Masson染色形态学观察及纤维化评分,肺组织进行羟脯氨酸测,结果显示:TRB3过表达纤维化程度更重,TRB3表达下调纤维化程度明显减轻。BALF中,TRB3过表达表现出细胞总数、中性粒细胞数明显增多,巨噬细胞减少。TRB3表达下调组结果相反。3.Western blot检测各组肺组织TRB3、p-ERK1/2、ERK1/2、p-p38MAPK、p38MAPK及EMT相关蛋白(如E-cadherin、Fibronectin、Vimentin、α-SMA)的表达,RT-q PCR检测TRB3、pro CollaⅠ/Ⅲm RNA的表达,结果显示:TRB3过表达组的p-ERK1/2、ERK1/2、p-p38MAPK、p38MAPK及EMT相关蛋白及pro CollaⅠ/Ⅲm RNA的表达上调;而TRB3表达下调组结果相反。结论1.TRB3过表达可增加EMT相关蛋白及m RNA的表达,TRB3基因表达下调后,结果相反。提示TRB3可能对EMT进行调控,进一步参与肺纤维化的形成。2.在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化可见TRB3及MAPK信号通路关键蛋白表达上调,提示TRB3可能通过MAPK信号通路参与纤维化过程。TRB3过表达可以加重博来霉素诱导的肺纤维化,TRB3下调则可减轻这一纤维化过程,即通过外源性调控TRB3可能会对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化产生影响。
[Abstract]:Objective 1.To investigate the role of TRB3 in fibrosis of C57BL/6 mice.Exogenous regulation of TRB3 on pulmonary interstitial fibrosis induced by bleomycin in C57BL/6 mice was conducted to explore the relationship between them in MAPK signaling pathway.Method 1.Animal model: bleomycin (3.5mg/kg) was injected into trachea. The next day, adenovirus was injected into tail vein. The mice were killed on day 714 and 28, respectively.Lung tissue HE/Masson staining morphology and fibrosis score, hydroxyproline determination of collagen content. ELASIA detection of lung tissue Colla 鈪，

本文编号：1735999