铀矿尘致RAW264.7细胞凋亡的线粒体相关途径的研究

发布时间：2016-11-19 07:34

  本文关键词：铀矿尘致RAW264.7细胞凋亡的线粒体相关途径的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《南华大学》 2015年

铀矿尘致RAW264.7细胞凋亡的线粒体相关途径的研究

李躲  

【摘要】：目的:探讨铀矿尘致RAW264.7细胞凋亡的线粒体相关途径的机制,为铀矿尘致肺损伤机制提供实验依据。方法:实验分为对照组(0μg/ml)和铀矿尘组(25、50、100、200和400μg/ml),通过MTT法检测不同浓度铀矿尘对小鼠巨噬细胞细胞(RAW264.7)存活率的影响及其时效关系;Hoechst33258荧光标记法及Annexin-V FITC/PI双染法分析铀矿尘对RAW264.7细胞凋亡形态学和凋亡率的影响;罗丹明123荧光探针检测铀矿尘作用于RAW264.7细胞后,线粒体膜电位的改变;Western Blot检测铀矿尘作用后的RAW264.7细胞中各凋亡相关蛋白的表达情况:细胞内细胞色素C(Cyt-c)以及线粒体和胞浆内Cyt-c,剪切的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase--3),剪切的半胱天冬酶-9(Cleaved-Caspase-9)、剪切的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved-PARP)、Bcl-2以及Bax。Q-PCR法检测铀矿尘对RAW264.7细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响;结果:MTT结果显示不同浓度铀矿尘作用于RAW264.7细胞不同时间后,细胞存活率呈染毒时间和剂量依赖性下降。将不同浓度铀矿尘作用于RAW264.7细胞24h后,Hoechst33258染色和Annexin-V FITC/PI双染法流式细胞仪检测,两者结果均显示RAW264.7细胞凋亡随着铀矿尘浓度的增加而增加。Rh123染色后,荧光分光光度法检测,提示线粒体膜电位随着铀矿尘浓度增加而降低。细胞内Cyt-c和胞浆内Cyt-c表达成上升趋势,而线粒体内Cyt-c的表达是降低的;Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9及Cleaved-PARP蛋白的表达均升高,提示这三种蛋白的前体均被激活。Q-PCR结果显示,随着铀矿尘浓度增加,Bcl-2基因表达降低而Bax基因表达增高;Western Blot结果显示:Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与其基因的表达趋势相同。结论:1.25~400μg/ml铀矿尘可以诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞发生凋亡;2.铀矿尘致RAW264.7细胞的凋亡作用可能是通过依赖Caspase-3的线粒体途径实现的;3.Bcl-2蛋白家族中Bcl-2和Bax可能参与调节铀矿尘致RAW264.7细胞的凋亡。

【关键词】：
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R135.2
【目录】：

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