探讨过继转移日本血吸虫感染鼠树突状细胞通过对白介素-13的调控而抑制过敏性哮喘黏液分泌的作用机制

发布时间：2018-05-04 20:09

本文选题：日本血吸虫 + 过敏性哮喘　；参考：《天津医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:探讨过继转移日本血吸虫感染鼠树突状细胞通过对白介素-13细胞因子的调控而抑制过敏性哮喘黏液分泌的作用机制。方法:取10只正常对照小鼠和10只日本血吸虫(SJ)感染小鼠,用于分离DC。实验分正常组(control)、日本血吸虫感染组(SJ)、OVA组(OVA诱发哮喘组),SJ+OVA组(过继转移日本血吸虫感染鼠DC+OVA诱发哮喘组),每组各6只小鼠(随机分组)。1.体内SJ感染鼠模型的建立,采用MACS磁珠分选方法从SJ感染小鼠及对照小鼠脾脏中提取DC,分别经尾静脉过继转移给BALB/C小鼠,并用OVA诱发哮喘,4周后处死小鼠。2.肺组织提取,制作病理切片,以HE染色及PAS染色方法以及免疫等方荧光染色法检测肺组织病理变化及相关蛋白表达情况。3.肺组织总RNA提取。采用qRT-PCR检测各组白介素-13 mRNA水平以及蛋白水平在肺组织中的表达情况。4.脾细胞提取,用ELISA方法检测脾细胞上清液中白介素-13水平。5.体外实验,细胞提取共培养。处死小鼠,取小鼠股骨,收集DC细胞。取小鼠脾脏,制备单个脾细胞悬液,用MS柱收集CD4~+T细胞。建立DC与CD4~+T细胞共培养,提取DC与CD4~+T细胞共培养细胞中总RNA,测定总RNA质量及浓度,检测白介素-13的表达。结果:1.在体内实验中,观察单纯OVA诱发哮喘组和SJ+OVA组肺部病理切片发现,与单纯对照组相比,OVA诱发哮喘组和SJ+OVA组肺部均有炎性细胞浸润,证明OVA诱导组诱导成功。但与单纯OVA诱发哮喘组相比,SJ+OVA组肺部支气管管壁完整,肺间质炎性细胞浸润减轻,且支气管管壁增厚不明显,管腔内黏液减少。比较说明日本血吸虫感染鼠树突状细胞过继转移后能抑制炎性细胞浸润,同时能抑制黏液分泌。2.对过继转移组与单纯哮喘组白介素-13mRNA以及黏液蛋基因表达水平比较发现,与健康对照组和SJ组相比,SJ+OVA组白介素-13水平及黏液蛋白基因表达水平均明显升高;但与OVA诱导组相比,SJ+OVA组白介素-13水平及黏液蛋基因表达明显受到抑制(P0.05)。进一步用免疫荧光染色方法检测白介素-13与气道黏液蛋白MUC(MUC为黏液蛋白,我们测定重要的黏液蛋白之一-MUC5AC)结果显示:与OVA单纯诱导组相比,SJDC过继转移组白介素-13及气道黏液蛋白表达明显受到抑制。3.白介素-13表达细胞的鉴定实验中,利用SEA刺激细胞(模拟体内SJ感染刺激),结果显示,LPS刺激组与SEA刺激组相比,白介素-13 mRNA表达升高,但相对于GAPDH表达量过低,提示DC不是白介素-13最主要的诱导细胞。采取免疫荧光染色方法进一步鉴定白介素-13的表达细胞(OVA单纯哮喘肺组织),白介素-13与CD4~+T细胞出现共同表达区域,提示在该模型中CD4~+T细胞为白介素-13的主要表达细胞。4.对脾细胞培养上清液中白介素-13水平检测显示:与Control组相比,OVA组与SJ+OVA组白介素-13均显著升高。与OVA组相比,SJ+OVA组白介素-13水平明显受抑制,且有显著性差异,与体内实验肺部组织白介素-13的变化。5.体外细胞共培养结果显示:DC经SEA处理后与OVA诱导鼠中提取的CD4+T细胞共培养。共培养后48 h及72 h时,SEA处理组DC与对照组(未经处理DC)和LPS刺激组相比,白介素-13的表达受抑制,提示SEA处理后的DC可抑制CD4~+T细胞的白介素-13的表达。结论:1.SJDC过继转移后不仅抑制炎性细胞浸润,同时对黏液分泌具有一定的抑制作用。2.DC不是白介素-13最主要的诱导细胞,在该模型中CD4~+T细胞为白介素-13的主要表达细胞。3.SEA处理后的DC可抑制CD4~+T细胞的白介素-13的表达。
[Abstract]:Objective : To study the mechanism of inhibiting the secretion of IL - 13 in mice infected with OVA . Methods : 10 normal control mice and 10 mice infected with SJ + OVA were isolated from the spleen of SJ + OVA group . The expression of interleukin - 13 ( IL - 13 ) in spleen cells was significantly increased compared with control group .

【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R562.25;R532.21

【参考文献】