P-V杀白细胞素相关肺损伤的炎症机制研究

发布时间：2018-05-11 19:46

本文选题：金黄色葡萄球菌 + Panton-Valetine　；参考：《安徽医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：金黄色葡萄球菌是引起人类各种感染性疾病的重要病原菌，携带P-V杀白细胞素(Panton-Valentine leukocidin, PVL)基因的金葡菌致病性增强，分布更广，可引起社区人群的严重感染。大量临床流行病学资料都强烈提示，PVL是金黄色葡萄球菌所致坏死性感染的重要毒力因素，但其致病机制尚不清楚。本课题通过体内试验观察重组PVL（rPVL）引起兔肺炎性损伤的变化，探讨多形核粒细胞(PMNs)、核转录因子-κB（NF-κB）和细胞因子在肺炎症性损伤中的作用，为阐释PVL的致病机制，寻求PVL相关肺炎症性损伤治疗方法提供新思路。方法：（1）动物模型的建立：取45只新西兰大白兔随机分为3组，分别为正常对照组、rPVL组和VCR+rPVL组（实验前用长春新碱预处理），每组15只。正常对照组使用PBS灌肺，其它两组均用rPVL灌肺。（2）BALF中PMNs计数、凋亡/坏死、ROS、LDH和LPI检测：造模后9h，采集支气管肺泡灌洗液（BALF），计数BALF中PMNs，流式细胞术（FCM）检测BALF中PMNs的凋亡/坏死率和活性氧（ROS）自由基释放量，比色法检测BALF上清中乳酸脱氢酶（LDH）含量，BCA法检测肺通透指数（LPI）。（3）肺组织湿干比及病理检测：造模后9h，收集肺组织检测湿重/干重比，并进行苏木精-伊红（HE）染色。（4）肺组织细胞因子和NF-κB检测：分别于造模后3h、6h和9h收集肺组织，每个时间段5只，ELISA方法检测肺组织匀浆上清中IL-6、IL-8、TNF-α和IL-10含量变化，免疫组织化学和Western blotting方法检测肺组织NF-κB p65蛋白的表达。结果：（1）与正常对照组比较，rPVL组BALF中PMNs数量显著增高，为(3.01±0.02)×106/ml vs（0.57±0.01)×106/ml；BALF中PMNs以晚期凋亡为主，晚期凋亡率显著增高，为（63.56±3.53）%vs（0.95±0.33）%；PMNs释放ROS增多，，平均荧光强度（MFI）为（1.56±0.39）vs（0.41±0.03）；LDH含量和LPI均显著增高。VCR+rPVL组BALF中各项炎症指标均无明显增高。（2）与正常对照组比较，rPVL组肺湿重/干重比显著增高，为（6.45±0.35）vs（3.51±0.17），肺组织病理检查显示有弥漫性炎性细胞浸润、出血、水肿等。VCR+rPVL组肺组织湿重/干重比无明显增高，病理检查未见明显炎性变化。（3）rPVL组肺组织匀浆上清中IL-6、IL-8、TNF-α含量逐渐升高，IL-10含量于9h开始升高。VCR+rPVL组各种细胞因子含量均无明显升高。免疫组织化学方法检测结果显示，rPVL组NF-κBp65被激活转入核内，染色以核明显，且呈时间依赖性。VCR+rPVL组胞核中极少见或没有阳性免疫反应物质。Western blotting方法检测结果表明，rPVL组肺组织细胞核内NF-κBp65蛋白表达明显增加，且具有时间依赖性。结论：（1）本课题通过体内实验证实rPVL可以不依赖于细菌的生存和繁殖，单独引起肺组织炎症性损伤。（2）rPVL引起肺炎症性损伤依赖PMNs的招募和聚集，继而坏死，释放细胞毒素颗粒内容物和通过呼吸爆发释放活性氧代谢产物，引起肺组织损伤。（3）rPVL感染后，肺组织表现有NF-κB持续活化，促炎因子IL-6、IL-8、TNF-α含量逐渐升高，后期伴有抑炎因子IL-10升高。推测rPVL可能通过激活NF-κB，诱导促炎因子产生，促发炎症级联反应，引起肺组织损伤。
[Abstract]:Objective : Staphylococcus aureus is one of the most important pathogens causing various infectious diseases in human beings .

Methods : ( 1 ) Establishment of animal model : 45 New Zealand rabbits were randomly divided into three groups : normal control group , rPVL group and VCR + rPVL group ( pretreated with vinblastine before experiment ) .

Results : ( 1 ) Compared with the control group , the number of PMNs in BALF of rPVL group was significantly increased , ( 3.01 卤 0.02 ) 脳 106 / ml vs ( 0.57 卤 0.01 ) 脳 106 / ml ;
In the BALF , PMNs were mainly in the late stage and the apoptosis rate was significantly higher in the late stage , ( 63.56 卤 3.53 ) % vs ( 0.95 卤 0.33 ) % .
The mean fluorescence intensity ( MFI ) of PMNs was ( 1 . 56 卤 0.39 ) vs ( 0.41 卤 0.03 ) .
The levels of IL - 6 , IL - 8 , TNF - 伪 in the lung tissues of the patients with VCR + rPVL were significantly higher than those in the normal control group . The results showed that the levels of IL - 6 , IL - 8 and TNF - 伪 in the lung tissues of the rPVL group were significantly higher than those in the normal control group .

Conclusion : ( 1 ) In vivo experiments , rPVL can not depend on the survival and reproduction of bacteria , which can cause inflammatory injury of lung tissue . ( 2 ) The pulmonary inflammatory injury depends on recruitment and aggregation of PMNs , then necrosis , release of cytotoxic granule contents and release of active oxygen metabolites through respiratory burst .

【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R563.8

【参考文献】