β-catenin蛋白敲除抗肺上皮细胞—间质转化的研究

发布时间：2018-09-06 11:06

【摘要】：目的：通过在肺泡Ⅱ型上皮细胞内转染β-catenin蛋白敲除载体(SCF～(β-TrCP)-Ecad),来观察β-catenin蛋白敲除对TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞-间质转化的影响作用,进一步探讨β-catenin信号通路在TGF-β1致上皮细胞-间质转化(EMT)中的作用及β-catenin蛋白敲除对EMT的治疗作用。 方法：在体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN),分别采用空质粒(pcDNA3)、β-catenin蛋白敲除载体(SCF～(β-TrCP)-Ecad)转染RLE-6TN后,TGF-β1(5ng/mL)干预24h,分为正常对照组(A组)、RLE-6TN加TGF-β1组(B组)、pcDNA3转染加TGF-β1组(C组)、SCF～(β-TrCP)-Ecad转染加TGF-β1组(D组),采用Western blot检测各组细胞E-钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(Fn)的表达；采用RT-PCR技术检测β-catenin途径下游转录产物Snail表达。 结果： 1. Western blot检测各组细胞E-cadherin、α-SMA、Fn蛋白水平：与A组比较,B组、C组其α-SMA、Fn蛋白表达显著升高,E-cadherin表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05)；B组与C组比较无明显统计学差异,与B组、C组比较,D组其α-SMA、Fn蛋白表达显著降低,而E-cadherin表达显著升高,差异有统计学意义(P0.05)；A组与D组比较无明显统计学差异。 2、各组细胞β-catenin途径下游转录产物Snail表达的实时定量PCR结果：与A组比较,B组、C组其β-catenin途径下游转录产物Snail表达增高,差异有统计学意义(P0.05)；B组与C组比较无明显统计学差异,与B组、C组比较,D组其β-catenin途径下游转录产物Snail表达降低,差异有统计学意义(P0.05)；A组与D组比较无明显统计学差异。 结论： 1、TGF-β1可诱导RLE-6TN上皮细胞-间质转化,表现为间质细胞标志物表达上调,上皮细胞标志物的表达下调,β-catenin是TGF-β1致上皮细胞-间质转化途径中重要的信号因子。 2、β-catenin蛋白敲除通过减少细胞内β-catenin表达,阻断TGF-β1介导的上皮细胞-间质转化,阻止纤维化进程。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of 尾 -catenin protein knockout vector (SCF~ (尾 -TrCP) -Ecad) on the TGF- 尾 1-induced interstitial transformation of alveolar type 鈪，

本文编号：2226162