胎盘间充质干细胞在油酸型急性肺损伤中的炎症调节作用研究

发布时间：2018-10-17 15:10

【摘要】：目的探讨人胎盘间充质干细胞(human placenta-derivedmesenchymal stem cells, hpMSCs)对油酸型大鼠急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的炎症因子IL-8/IL-10的调节作用,同时检测小G蛋白(RhoA)在油酸型急性肺损伤大鼠肺组织中的表达变化,探讨移植hpMSCs对RhoA的表达的影响,为进一步揭示间充质干细胞在调节急性肺损伤炎症反应中的作用机制,为寻找靶向治疗肺部及其他炎性疾病提供理论依据,同时为胎盘间充质干细胞在调节炎症治疗肺损伤方面提供依据方法采用胶原酶酶消化法体外培养并扩增人胎盘间充质干细胞,体外培养传代、细胞计数,生长曲线及向神经、成骨诱导来证明胎盘间充质干细胞。采用油酸舌下静脉注射法建立大鼠急性肺损伤模型,进行间充质干细胞移植治疗。将36只健康雄性SD大鼠随机分为3组,每组12只：(1)正常对照组(n=12),经舌下静脉注入0.5m1生理盐水；(2)急性肺损伤组(n=12),经舌下静脉注射油酸(0.2ml/kg),然后立即经另一侧注入相应量的生理盐水；(3)细胞移植组(n=12),经舌下静脉注射油酸(0.2ml/kg),然后经另一条舌下静脉注入培养的人胎盘间充质干细胞(1.0×106溶于0.5ml生理盐水)。各组在实验后24h麻醉状态下活杀动物,每组12只。经腹主动脉取血、离心分离血浆,采用酶联免疫吸附法测定血浆IL-10、IL-8的含量；对肺组织测定湿／干重比值,制作肺组织切片以HE染色法行病理学检查,免疫组织化学染色、Real-time PCR、Western Blot检测大鼠肺组织中RhoA的表达变化。结果 1、人胎盘MSCs的分离,培养及多向分化能力：采用酶消化法分离培养人胎盘MSCs。随传代次数的增多,人胎盘MSCs增殖能力减弱；体外诱导实验显示,人胎盘MSCs可向成骨细胞和神经细胞等多向分化。 2、油酸型急性肺损伤大鼠模型的建立及hpMSCs移植对ALI的影响：通过注射油酸后观察大鼠的一般状况,肺组织的大体形态,组织切片HE染色显示,与正常组比较,损伤组及移植组肺组织炎症改变明显,但移植组较损伤组炎症明显减轻。在损伤24h后,与正常组比较,移植组及损伤组肺W/D值,血浆IL-8及IL-10水平明显升高；与损伤组比较,移植组肺W/D值,血浆IL-8明显降低,IL-I0水平高于损伤组,但与对照组比较无明显差异。免疫组化、Real-time PCR、Western Blot检测大鼠肺组织中RhoA的表达情况显示,与正常组比较,损伤组及移植组大鼠肺组织RhoA表达量明显升高,与损伤组比较,移植组大鼠肺组织RhoA的表达量明显降低。结论 1、采用酶消化法成功分离并培养传代的人胎盘间充质干细胞且可向成骨细胞和神经细胞等多向分化。 2、油酸舌下静脉注射可成功复制急性肺损伤模型损伤。移植人胎盘间充质干细胞后可降低损伤早期肺组织W/D值、血浆细胞因子IL-8的水平,提高IL-10的水平,从而利于调节炎症因子的失衡问题. 3、急性肺损伤肺组织存在RhoA的高表达,移植人胎盘间充质干细胞后,能够降低其表达量,胎盘间充质干细胞在急性肺损伤早期调节炎症因子的平衡表达中,可能是通过调节RhoA的表达来完成。
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【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R563.8

【参考文献】