肺炎衣原体感染通过激活Racl诱导血管平滑肌细胞迁移

发布时间：2017-01-02 08:40

  本文关键词：肺炎衣原体感染通过激活Racl诱导血管平滑肌细胞迁移，，由笔耕文化传播整理发布。

《天津医科大学》 2013年

肺炎衣原体感染通过激活Racl诱导血管平滑肌细胞迁移

张俊霞  

【摘要】：目的 利用肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae, C.pn)体外感染大鼠原代血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell, VSMC)模型,观察Racl活化在C.pn感染诱导VSMC迁移中的作用以及在此过程中Racl活化与PI3K、IQGAP1的联系,探讨其相关分子机制。 方法 1.C.pn增殖培养后体外感染大鼠原代VSMC; 2. GST pull-down实验检测C.pn感染VSMC后不同时间点Racl的活性； 3.用Racl特异性抑制剂NSC23766抑制Rac1的活性,GST pull-down实验检测VSMC内GTP-Racl的表达变化,Wound-healing实验和Transwell实验观察VSMC迁移能力的改变； 4.用PI3K特异性抑制剂LY294002抑制PI3K的活性,GST pull-down实验检测VSMC内Rac1活性的变化,明确PI3K在C.pn感染诱导VSMC内Rac1活化过程中的作用； 5.用Rac1特异性抑制剂NSC23766抑制Racl的活性,Western blot实验检测VSMC内IQGAP1表达的变化,明确C.pn感染后VSMC内Racl活化对其下游效应蛋白IQGAP1的影响。 结果 1.目的质粒转染大肠杆菌,体外制备足量有效与GTP-Racl特异结合的GST-PBD融合蛋白；分别于C.pn感染VSMC0h、0.5h、1h、2h、3h、6h、8h和12h后提取总蛋白,GST pull-down实验结果显示,C.pn感染VSMC0.5h后GTP-Racl表达水平开始升高；随着感染时间延长其表达水平逐渐升高,3h左右达高峰,8h开始下降,并持续至12h；而各时间点VSMC中总Racl表达水平无显著差异。 2. GST pull-down实验结果显示,使用Rac1特异性抑制剂NSC23766预处理VSMC后,C.pn感染诱导的VSMC内GTP-Racl的表达水平明显降低。用NSC23766预处理的C.pn感染组的VSMC内GTP-Racl的表达水平较单纯C.pn感染组明显降低(P0.05),差异有统计学意义；各组VSMC中总Rac1表达无显著差异。 3. Wound-healing实验结果显示,NSC23766预处理的C.pn感染组VSMC向划痕中央迁移的面积明显小于单纯C.pn感染组(P0.05)；Transwell实验结果显示,NSC23766预处理的C.pn感染组VSMC的穿膜细胞数明显低于单纯C.pn感染组(P0.05),差异有统计学意义。 4.使用PI3K抑制剂LY294002预处理VSMC, GST pull-down实验结果显示,LY294002预处理的C.pn感染组VSMC内GTP-Racl的表达水平较单纯C.pn感染组明显降低(P0.05),差异有统计学意义；各组VSMC中总Rac1表达无显著差异。 5.使用Rac1特异性抑制剂NSC23766预处理VSMC, Western blot实验结果显示,50μMNSC23766预处理的C.pn感染组VSMC内IQGAP1的表达水平虽较单纯C.pn感染组有所下降(P0.05),但差异无统计学意义；100μMNSC23766预处理的C.pn感染组VSMC内IQGAP1的表达水平较单纯C.pn感染组则明显降低(P0.05),差异有统计学意义。 结论 C.pn感染可能通过激活Rac1促进VSMC迁移,且在此过程中Rac1的活化依赖PI3K的酶活性,活化的Rac1可影响其下游效应蛋白IQGAP1的表达,即C.pn感染可能通过PI3K活化Rac1进而激活IQGAP1促进VSMC迁移。

【关键词】：
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R563.19
【目录】：

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