不同构型脂联素对香烟烟雾提取物诱导人支气管上皮细胞TNF-a和IL-8表达的影响

发布时间：2018-11-29 13:38

【摘要】：研究背景支气管上皮是保护气道组织免受外界侵害的第一道生理屏障，同时在系统性炎症反应中也起着非常重要的作用。研究资料表明，香烟能够诱导气道上皮细胞产生炎症因子，造成气道慢性炎症和持续损伤，最终形成慢性阻塞性肺疾病(COPD)。脂联素(adiponectin)是一种由脂肪组织分泌的大分子蛋白质，在血清中，以全长结构[三倍体，六倍体以及高等分子量体(highmolecularweight，HMW)]和球型结构域(globularadiponectin，gAd)存在。脂联素全长结构主要激活脂联素受体2，而球型结构域主要激活脂联素受体1，各型脂联素通过激活其相应的受体发挥调节糖脂代谢、抗动脉粥样硬、有抗炎、减少氧化应激和内皮保护作用。目前相关研究发现，高等分子量体脂联素（HMW）在单核巨噬细胞和血管内皮细胞中发挥抗炎作用，球型结构域脂联素（gAd)可以诱发巨噬细胞凋亡。也有学者提出球型结构域脂联素（gAd)具有抵抗血管内皮细胞凋亡、保护血管内皮细胞的作用。但目前尚未检索到不同构型脂联素对支气管上皮细胞的作用。目的通过研究高等分子量体脂联素和球形结构域脂联素对香烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞TNF-a和IL-8表达的影响，探讨不同构型脂联素在气道慢性炎症中的作用。方法采用16HBECs细胞株进行以下实验。 (1)CSE对16HBECs的抑制作用与半数抑制浓度：16HBECs常规培养后接种于24孔培养板中，随机分为对照组和实验组。对照组加入对照培养液，实验组分别用2.5%、5%、7.5%、10%浓度的CSE干预细胞，常规培养24h后MTT比色法检测不同浓度的CSE对16HBECs的抑制作用。 (2)不同构型脂联素对CSE诱导16HBECs表达TNF-a和IL-8蛋白的干预作用： 16HBECs常规培养后接种于6孔培养板中，随机分为对照组、5%CSE组、高等分子量体脂联素（HMW）干预组和球形结构域脂联素（gAd）干预组。对照组加入对照培养液；5%CSE组加入5%浓度CSE孵育24h；HMW干预组先以5、10、20ug/ml的HMW预处理细胞2h，，再与5％CSE共同孵育24h；gAd干预组先以5、10、20ug/ml的gAd预处理细胞2h，再与5％CSE共同孵育24h，收集各组的细胞上清液，，ELISA法检测上清液中TNF-a和IL-8蛋白含量。结果 (1)CSE对16HBECs的抑制作用：16HBECs与不同浓度CSE培养24h后，CSE组与对照组比较，CSE对16HBECs有显著的抑制作用，差异有统计学意义（均P0.05），且随着药物浓度的增加，CSE对细胞的抑制作用增强，呈剂量--效应关系。CSE对16HBECs的半数抑制浓度约为5%。 (2)CSE对16HBECsTNF-a和IL-8蛋白表达水平的影响 5％CSE组TNF-a和IL-8蛋白含量均高于对照组，差异均有统计学意义(均P0.05) (3)不同构型脂联素对5％CSE诱导16HBECsTNF-a蛋白表达水平的影响 ①3个不同浓度HMW干预组TNF-a蛋白含量均低于5％CSE组，但高于对照组，差异均有统计学意义(均P0.05)。 ②10ug/mlHMW干预组TNF-a蛋白含量低于5ug/mlHMW干预组高于20ug/mlHMW干预组。 ③3个不同浓度gAd干预组TNF-a蛋白含量均低于5％CSE组，但高于对照组，差异均有统计学意义(均P0.05)。 ④10ug/mlgAd干预组TNF-a蛋白含量低于5ug/mlgAd干预组高于20ug/mlgAd干预组。 (4)不同构型脂联素对5％CSE诱导16HBECsIL-8蛋白表达水平的影响 ①5ug/mlHMW干预组IL-8蛋白含量虽低于5％CSE组，但差异无统计学意义（P0.05）；与对照组比较，差异有统计学意义(P0.01)。10ug/ml和20ug/mlHMW干预组IL-8蛋白含量均低于5％CSE组，但高于对照组，差异均有统计学意义(均P0.01)。 ②10ug/mlHMW干预组IL-8蛋白含量低于5ug/mlHMW干预组高于20ug/mlHMW干预组。 ③3个不同浓度gAd干预组IL-8蛋白含量均低于5％CSE组，但高于对照组，差异均有统计学意义(均P0.05)。 ④10ug/mlgAd干预组IL-8蛋白含量低于5ug/mlgAd干预组高于20ug/mlgAd干预组。结论 (1)HMW和gAd两种不同构型脂联素均可抑制CSE诱导的人支气管上皮细胞TNF-a和IL-8蛋白的表达。 (2)在5ug/ml～20ug/ml浓度范围内，HMW和gAd两种不同构型脂联素对CSE诱导的人支气管上皮细胞TNF-a和IL-8蛋白抑制作用呈剂量--效应关系。
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【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R563.9

【参考文献】