小鼠急性肺损伤时期促炎症消退介质脂氧素的变化及调节机制研究

发布时间：2019-01-03 07:40

【摘要】：第一部分小鼠脂多糖诱导急性肺损伤自我消退模型的建立及内源性脂氧素表达的研究目的：研究脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)气管内滴注诱导急性肺损伤的变化规律以及脂氧素A4及其合成途径中5-脂加氧酶的表达,以探讨脂氧素A4在急性肺损伤期间的作用,以及5-脂加氧酶的变化规律。方法：雄性BALB/c小鼠6-8周,体重20-25g,随机将将动物分成3组：(1)零点组(Zero point, O group):得到小鼠后即刻处理；(2)对照组(Control group, C):采用生理盐水气管内滴注,按照1.5μl/g给药；(3)急性肺损伤组(Acute lung injury group,ALI)：气管内滴注脂多糖,按照3μg/g剂量滴注。C组和ALI组在给药后6小时,12小时,1天,2天,4天,7天处理小鼠。光镜检测小鼠肺HE染色切片,并进行评分；BCA法检测肺泡灌洗液中蛋白溶度；ELISA法检测肺泡灌洗液中白介素-1β(interleukin-1beta, IL-1β),肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)和脂氧素A4(LXA4)的浓度; real-time PCR法检测肺组织中5-脂加氧酶(5-lipoxygenase,5-LO)基因水平的表达。结果：气管内滴注3μg/g脂多糖诱导急性肺损伤发生后：①零点组合对照组肺组织结构没有明显变化,急性肺损伤组则出现肺泡毛细血管充血,肺泡腔内炎性细胞浸润、肺泡间隔增粗等现象,但随着时间推移,这些现象逐渐减轻,在7天时部分恢复正常状态；急性肺损伤评分在一天组中达到高峰,进而下降；②与零点组和对照组比较,急性肺损伤组肺组织湿干重比在各个时间点升高明显；③与零点组和对照组比较,急性肺损伤组中细胞总数在1天时达到顶点,随后下降：④与零点组与对照组比较,急性肺损伤组BALF中蛋白含量6小时到1天组呈上升趋势,从1天组到7天组呈下降趋势；⑤与零点组和对照组比较,急性肺损伤组中BALF中TNF-α在1天时达到顶点,随后下降；IL-1p在12小时达到高峰期,随后下降；⑥与零点组和对照组比较,急性肺损伤组中BALF中的脂氧素合成在1天和7天时达到高峰期,6小时组到1天组呈上升趋势,1天组后下降,随后4天组到7天组呈上升趋势；⑦与零点组和对照组比较,急性肺损伤组肺组织5-LO mRNA6小时到1天组呈上升趋势,随后下降；4天组到7天组中呈上升趋势。结论：气管内滴注脂多糖能成功诱导急性肺损伤的发生,且5-脂加氧酶在脂氧素合成途径中起到重要作用。由实验结果推断此模型急性肺损伤在24小时左右达到高峰期,针对此时期进行干预可能对急性肺损伤的预后有一定的作用。第二部分过氧化物酶增殖物激活受体γ激动剂罗格列酮预处理对急性肺损伤时脂氧素生成的调控目的：研究过氧化物酶增殖物激活受体γ (PPARγ)激动剂罗格列酮对脂多糖(LPS)气管内滴注诱导急性肺损伤的保护作用,和对内源性脂氧素(LXA4)合成以及对脂氧素合成途径中5-脂加氧酶的表达变化的影响,以探讨过氧化物酶增殖物激活受体γ激动剂罗格列酮与脂氧素A4以及5-脂加氧酶的内在联系。方法：以脂多糖气管内滴注制作急性肺损伤模型,根据给药将动物分成7组：(1)对照组(Control group, C):采用生理盐水气管内滴注,按照1.5ml/kg给药；(2)急性肺损伤组(Acute lung injury group, ALI):气管内滴注脂多糖,按照3mg/kg剂量滴注。(3)罗格列酮溶剂组(LPS+DMSO (1:10)):DMSO溶液(DMSO:NS=1:10,体积比)灌胃三天后,气管内滴注脂多糖3mg/kg;(4) GW9662溶剂组(LPS+DMSO (1:100)):DMSO溶液(DMSO:NS=1:100,体积比),腹腔内注射1.5小时后,给予LPS气管内3mg/kg滴注；(5)罗格列酮预处理组(ROS+LPS):罗格列酮10mg/kg灌胃给药3天后,气管内给予LPS3mg/kg滴注；(6)GW9662组(GW9662+LPS):小鼠腹腔内给予GW9662lmg/kg,1.5小时后LPS3mg/kg气管内滴注；(7)罗格列酮+GW9662组(ROS+GW9662+LPS):罗格列酮预处理3天后,GW9662腹腔内注射给药,1.5小时后给予LPS气管内滴注刺激。各组在给予LPS24小时后处理小鼠。光镜检测小鼠肺HE染色切片,并进行急性肺损伤评分；BCA法检测肺泡灌洗液中蛋白溶度；ELISA法检测肺泡灌洗液中白介素-1β (IL-1β),肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和脂氧素A4(LXA4)的浓度；Western blotting检测肺组织中5-脂加氧酶的蛋白表达。结果：罗格列酮预处理减轻了脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤病理学改变和降低了急性肺损伤评分；罗格列酮预处理减少了小鼠BALF中的细胞总数,降低了BALF中蛋白浓度。罗格列酮预处理还降低了小鼠BALF中TNF-α和IL-1β的浓度,检测lipoxin A4浓度升高。同时发现预处理后小鼠肺组织中5-LO的表达增加。结论：过氧化物酶增殖物激活受体丫激动剂罗格列酮预处理对肺损伤有一定的保护作用；PPARy能促进肺组织中脂氧素的合成,同时促进5-LO的表达。第三部分阿司匹林诱生型脂氧素后处理对急性肺损伤时期过氧化物酶增殖物受体Y的影响目的：证实外源性给予阿司匹林诱生型脂氧素(Aspirin-triggered lipoxinA4, ATL)对由内毒素引起的小鼠急性肺损伤的保护作用,以及对急性肺损伤时期小鼠体内过氧化物酶增殖物受体γ (Peroxisome Proliferated-Activated Receptor Gamma, PPARy)活性的影响。以探讨脂氧素A4与过氧化物酶增殖物受体γ的相互联系。方法：以脂多糖气管内滴注制作急性肺损伤模型,根据给药将动物分成7组：(1)对照组(Control group, C):采用生理盐水气管内滴注,按照1.5ml/kg给药；(2)急性肺损伤组(Acute lung injury group, ALI):气管内滴注脂多糖,按照3mg/kg剂量滴注。(3)GW9662溶剂组(LPS+DMSO):DMSO溶液(DMSO:NS=1:100,体积比),腹腔内注射1.5小时后,给予LPS气管内3mg/kg滴注；(4)ATL溶剂组(LPS+NS):气管内给予脂多糖3mg/kg滴注,1小时后尾静脉注射100μ1生理盐水；(5)ATL后处理组(LPS+ATL):LPS3mg/kg气管内滴注,1小时后尾静脉按ATL7μg/g注射；(6)GW9662+ATL组(GW9662+LPS+ATL):腹腔内注射GW96621.5小时后气管内给予脂多糖3mgkg滴注,1小时后尾静脉按ATL7μg/g注射；各组在给予LPS24小时后处理小鼠。光镜检测小鼠肺组织HE染色切片,并行急性肺损伤评分；BCA法检测小鼠肺泡灌洗液中蛋白溶度；ELISA法检测肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)、白介素-Iβ (interleukin-1beta, IL-1β)和脂氧素A4(lipoxinA4)的浓度；Western blotting检测肺组织核蛋白中PPARy的蛋白表达。结果：ATL减轻了由LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型的病理学改变,降低了肺损伤评分；ATL减少了模型BALF中的细胞总数,降低了湿干重比值；ATL减少了模型BLAF中蛋白含量；ATL减少了细胞因子TNF-α和IL-1p的浓度；在WB检测中,ATL增加了肺组织中PPARγ的表达。结论：ATL能减轻小鼠急性肺损伤模型的损伤状态,对肺损伤起到一定的保护作用；这些作用是通过增加PPARγ表达来实现的。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R563

【相似文献】