法舒地尔下调哮喘气道炎症和抗氧化作用的机制研究

发布时间：2019-02-18 21:58

【摘要】：目的：最近研究表明法舒地尔在哮喘中起着重要的作用，但目前机制仍不十分清楚，因此本实验研究Rho激酶（Rho-kinase, ROCK）-1抑制剂法舒地尔在支气管哮喘（简称哮喘）中抗炎和抗氧化应激的作用，探讨ROCK-1抑制剂在哮喘中的作用。方法：本实验分三部分：1.动物实验：5～6周健康BALB/C雌性小鼠24只，随机分为对照组、哮喘组和法舒地尔组，每组8只。哮喘组和法舒地尔组用卵清蛋白（Ovalbumin, OVA）溶液腹腔注射与鼻腔滴入致敏和激发，法舒地尔组在滴鼻前用法舒地尔干预，对照组给予同等剂量生理盐水。激发后各组均测定气道反应性，行肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）细胞计数，肺组织苏木精—伊红（Hematoxylin-eosin staining,HE）染色和高碘酸—希夫(Periodic Acid-Schiff, PAS)染色，免疫印记（Western Blot）法检测NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1，免疫荧光测定MUC5AC的表达水平，ROS荧光探针-DHE检测肺组织内活性氧族物质（Reactive Oxygen Species, ROS）的表达情况。2.细胞实验：分为对照组、屋尘螨组和法舒地尔组，法舒地尔组先予法舒地尔（浓度为45umol/l）干预1h后，屋尘螨组和法舒地尔组同时予屋尘螨（浓度为20ug/ml）干预24h后，用WesternBlot法检测NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1，免疫荧光测定MUC5AC及ROS荧光探针-DHE检测细胞内ROS的表达情况。3.临床实验：收集哮喘发作期患者16例，随机分为常规治疗组和常规+法舒地尔（静脉输入，30mg/天）治疗组，每组8例，每组治疗疗程为1周，收集治疗前后血清标本各一份，采用ELISA法检测血清中IL-3、IL-4、IL-17和TNF-α的浓度。结果：1.动物实验：（1）气道的增强呼气间歇（Enhancedpause, Penh）值变化：法舒地尔组与哮喘组相比Penh值降低，气道反应性降低（P0.05）。（2）BALF中细胞学变化：法舒地尔组与哮喘组相比白细胞总数、中性粒细胞比例和嗜酸性粒细胞（Eosinophils, EOS）的比例降低（P0.05）。（3）各组小鼠肺组织镜下病理改变：哮喘组见大量炎症细胞浸润于支气管及周围肺组织，其中以中性粒细胞和淋巴细胞最多，支气管及肺泡腔内有渗出物，部分气管黏膜上皮坏死脱落，伴杯状细胞及平滑肌细胞增生。法舒地尔组与哮喘组相比气道炎症明显减轻，MUC5AC荧光强度减弱（P0.05），气道内黏液分泌减少（P0.05）。（4）法舒地尔组与哮喘组相比，，肺组织内ROS的表达浓度降低（P0.05）。（5）法舒地尔组与哮喘组相比NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1表达水平明显降低（P0.05）。2.细胞实验：（1）法舒地尔组与屋尘螨组相比，肺组织内ROS的表达量降低（P0.05）。（2）法舒地尔组与屋尘螨组相比MUC5AC荧光值明显减弱（P0.05）。（3）法舒地尔组与屋尘螨组相比NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1表达水平明显降低（P0.05）。3.临床实验：常规治疗组和常规+法舒地尔治疗组在治疗前后血清IL-3、IL-4、IL-17和TNF-α水平差异均有统计学意义（P0.05），治疗后较治疗前下降，但常规+法舒地尔治疗组前后治疗的血清IL-3、IL-4、IL-17和TNF-α浓度差值明显高于比常规哮喘组，并有统计学意义（P0.05）。结论：1.动物实验：哮喘小鼠通过上调哮喘相关因子和蛋白表达而诱发小鼠气道高反应性、肺组织的炎症和氧化应激，从而引发一系列哮喘临床症状。给予法舒地尔提前干预能在一定程度上减轻这一作用。2.细胞实验：屋尘螨可诱导人支气管上皮细胞（16human bronchialepithelial cells,16HBE）的氧化应激，上调相关炎症因子和蛋白表达，导致细胞损伤。法舒地尔提前干预可减轻上述作用。也证明法舒地尔有抗炎症和抗氧化应激的作用。3.临床实验：法舒地尔能够减轻哮喘患者血清中的哮喘相关炎症因子的浓度，再次证明法舒地尔能减轻哮喘患者炎症反应。4.综上说明Rho激酶-1可能参与过敏原诱导的哮喘气道炎症过程，Rho激酶-1抑制剂法舒地尔能够明显减轻哮喘气道高反应性、抗炎和抗氧化应激作用。
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【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R562.25

【共引文献】