C8-神经酰胺诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的研究

发布时间：2019-03-27 07:34

【摘要】：目的探讨外源性C8-神经酰胺(C8-ceramide)对肺泡Ⅱ型上皮细胞体外生存率的影响,以及C8-神经酰胺对肺泡Ⅱ型上皮细胞的诱导凋亡作用。方法取妊娠18天的ICR孕鼠一只,分离、培养原代胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type II epithelial cell,AECⅡ),使用免疫细胞化学鉴定法和透射电子显微镜对所获取的细胞进行鉴定。分别加入0、20、40、80μmol/L的C8-神经酰胺溶液,继续培养24 h,使用MTT法检测外源性C8-神经酰胺对AECⅡ增殖的影响,然后使用80μmol/L C8-神经酰胺溶液分别培养AECⅡ3、6、12、24 h,MTT法检测AECⅡ活力,并计算体外细胞生存率的变化。使用0、20、40、80μmol/L C8-神经酰胺溶液对AECⅡ进行体外干预,于12 h和24 h后,分别使用流式细胞术和TUNEL法检测各组细胞的凋亡率。结果细胞鉴定结果证明,通过本实验提取的细胞为胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,具有肺泡Ⅱ型上皮细胞的特征性结构。MTT结果提示,C8-神经酰胺对AECⅡ增殖具有明显抑制作用,并且具有浓度效应和时间效应。碘化丙啶染色法结果显示,C8-神经酰胺溶液浓度为0、20、40、80μmol/L时,12 h和24 h细胞总凋亡率分别为:(5.80±0.30)%、(7.00±0.10)%、(9.97±0.50)%、(12.67±0.67)%和(5.67±1.39)%、(8.87±0.49)%、(13.97±1.33)%、(18.80±0.46)%,各剂量组凋亡率与对照组相比差异均有统计学意义,且随着药物浓度的上升和时间的延长,细胞凋亡率呈上升趋势。AnnexinⅤ-FITC/PI双染法实验结果提示,C8-神经酰胺溶液浓度为0、20、40、80μmol/L时,12 h和24 h细胞总凋亡率分别为:(20.63±0.86)%、(22.67±1.72)%、(42.03±1.34)%、(50.40±1.30)%和(20.93±2.51)%、(28.93±3.19)%、(47.00±1.08)%、(57.77±3.04)%(除12小时20μmol/L组外,相同时间点,其他各组与对照组相比,差异均有统计学意义,均P0.05)。TUNEL法提示,C8-神经酰胺溶液浓度为0、20、40、80μmol/L时,12 h和24 h的凋亡率分别为:(5.51±1.41)%、(13.24±2.62)%、(35.10±4.59)%、(75.07±4.37)%和(5.56±1.36)%、(21.34±2.09)%、(37.12±2.11)%、(91.33±0.72)%(相同时间点,各浓度组与对照组相比,差异有统计学意义,均P0.05)。结论外源性C8-神经酰胺可抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞的生存率,并可诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡。
[Abstract]:Aim to investigate the effect of exogenous C8-ceramide (C8-ceramide) on the survival rate of alveolar type 鈪，

本文编号：2447999