蛋白激酶C-核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶-1的表达

发布时间：2019-04-22 11:50

【摘要】：目的:探讨蛋白激酶C(PKC)-红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法:将25只SD大鼠的气道上皮细胞随机分为对照组、CSE3h组、RO318220(PKC抑制剂)组、Nrf2 siRNA组和Nrf2 siRNA+RO318220组,每组5只。对照组用DMEM/F12正常培养,CSE3h组用10%CSE共培养3 h;RO318220组则用3μmol/L RO318220预处理0.5h,余处理同CSE3h组;Nrf2 siRNA组先用Nrf2 siRNA预处理,余处理同CSE3h组;Nrf2 siRNA+RO318220组则先用3μmol/L RO318220和Nrf2 siRNA预处理,余处理同CSE3h组。用Western印迹法分别检测HO-1,Nrf2和PKC蛋白表达,细胞免疫化学法观察HO-1蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HO-1mRNA表达,免疫荧光法观察Nrf2核转位,测定HO-1活性。结果:CSE明显诱导Nrf2核转位,其诱导作用可被RO318220阻断。HO-1蛋白在CSE3h组强阳性表达,在对照组、RO318220组、Nrf2 siRNA组和Nrf2siRNA+RO318220组均弱阳性表达。CSE3h组PKC蛋白、HO-1 mRNA和蛋白表达较对照组显著升高,HO-1活性较对照组明显增强(P0.05)。PKC蛋白表达水平在Nrf2 siRNA组和CSE3h组无明显差异(P0.05)。结论:CSE通过PKC信号通路诱导Nrf2核转位,上调HO-1的表达水平。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of protein kinase C (PKC)-erythroid derived nuclear factor-associated factor 2 (Nrf2) on the expression of heme oxygenase-1 (HO-1) in rat airway epithelial cells induced by cigarette smoke extract (CSE). Methods: twenty-five SD rats were randomly divided into three groups: control group, CSE3h group, RO318220 (PKC inhibitor) group, Nrf2 siRNA group and Nrf2 siRNA RO318220 group. The control group was cultured with DMEM/F12, the CSE3h group was co-cultured with 10%CSE for 3 h, the RO318220 group was pretreated with 3 渭 mol / L RO318220 for 0.5 h, the rest was pretreated with CSE3h, the Nrf2 siRNA group was pretreated with Nrf2 siRNA, and the other was treated with CSE3h. Nrf2 siRNA RO318220 group was pretreated with 3 渭 mol / L RO318220 and Nrf2 siRNA, and the others were the same as CSE3h group. The expression of HO-1,Nrf2 and PKC protein was detected by Western blot, the expression of HO-1 protein was observed by immunocytochemistry, the expression of HO-1mRNA was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), and the nuclear translocation of Nrf2 was observed by immunofluorescence. HO-1 activity was determined. Results: CSE significantly induced nuclear translocation of Nrf2, which could be blocked by RO318220. Ho-1 protein was strongly expressed in CSE3h group, and weakly expressed in control group, RO318220 group, Nrf2siRNA group and Nrf2siRNA RO318220 group. The expression of HO-1 mRNA and protein was significantly higher than that of the control group, and the activity of HO-1 was significantly higher than that of the control group (P0.05), but there was no significant difference in the expression level of PKC protein between the Nrf2 siRNA group and the CSE3h group (P0.05). Conclusion: CSE induces nuclear translocation of Nrf2 through PKC signaling pathway and up-regulates the expression of HO-1.
【作者单位】： 湖南省人民医院呼吸内科;
【分类号】：R563.9

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本文编号：2462810