雄激素剥夺对油酸诱导急性肺损伤肺泡上皮钠离子通道表达的研究

发布时间：2019-07-18 11:29

【摘要】：目的:观察通过手术去势方法降低大鼠体内雄激素水平对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(acute lung injury/acute respiratory distress syndrome,ALI/ARDS)肺组织中肺泡上皮钠离子通道α亚基(epithelial sodium channel alpha-subunit,ENaC-α)的影响。方法:20只Sprague-Dawley(SD)大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、假手术模型组、去势手术模型组4组,每组5只。以尾静脉注射油酸(oleic acid,OA)0.15 ml/kg复制ALI/ARDS模型,去势手术模型组和假手术模型组分别于造模前2周(14 d)行开腹双侧睾丸切除术或开腹但不行睾丸切除。于造模成功6 h后行开胸手术,测定肺湿重/干重比值(wet/ery,W/D),用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot测定肺组织中ENaC-αmRNA及蛋白的表达。结果:(1)与正常对照组比较,所有模型组大鼠肺组织病理学改变明显且W/D比值明显增加(模型组与正常对照组,P=0.000;假手术模型组与正常对照组,P=0.000;去势手术模型组与正常对照组,P=0.000)、ENaC-α的mRNA和蛋白表达明显降低(ENaC-αmRNA:模型组与正常对照组,P=0.000;假手术模型组与正常对照组,P=0.000;去势手术模型组与正常对照组,P=0.001;ENaC-α蛋白:模型组与正常对照组,P=0.000;假手术模型组与正常对照组,P=0.000;去势手术模型组与正常对照组,P=0.045)。(2)与模型组相比,去势手术组大鼠肺组织病理学改变较减轻,W/D比值明显降低(P=0.000)、ENaC-α的mRNA和蛋白表达明显上调(ENaC-αmRNA:去势手术模型组与模型组,P=0.002;ENaC-α蛋白:去势手术模型组vs.模型组,P=0.030)。结论:在ALI/ARDS发生时,雄激素本身对急性肺损伤时肺泡上皮细胞中ENaC-α的表达具有抑制作用,降低体内雄激素水平可以提高肺组织中ENaC-α的mRNA和蛋白的表达,降低肺组织水肿程度。
文内图片：光镜下观察各组大鼠肺组织病理学改变（HE，200×）

图片说明：飨约跚峄蚣又亍Ｔ炷：?6h，所有模型组大鼠呼吸均比对照组明显增加（模型组与正常对照组，P=0.000；假手术模型组与正常对照组，P=0.000；去势手术模型组与正常对照组，P=0.000），其中去势手术模型组较模型组缓解（P=0.000），假手术模型组与模型组无差异（P=0.756）（表1）。2.2雄激素剥夺对肺组织病理学改变影响正常对照组大鼠肺组织在肉眼下观察呈粉红色，未见明显充血、出血及肿胀，光镜下观察，肺组织结构完整、清晰，肺泡间质有较少炎症细胞浸润，无明显充血及出血，肺泡间隔无增宽，肺泡壁完整，腔内无水肿液（图1A）；模型组大鼠肺组织在肉眼观察下呈暗红色、肿胀，可见明显出血、充血，光镜下可见肺组织出现大面积肺泡壁破坏，肺泡腔内充满粉红色水肿液，肺泡间隔增宽、水肿，大量炎症细胞浸润及红细胞漏出，肺血管充血（图1B）；去势手术模型组大鼠肺组织肉眼观察仍可见肿胀及充血、出血，但程度较油酸模型组轻，光镜下可见肺组织仍与油酸模型组有相同的病理改变，但受损面积明显减小，肺泡腔内水肿液减少，肺泡间质水肿、炎症细胞浸润及红细胞漏出明显减轻（图1C）；假手术模型组大鼠肺组织与模型组大鼠无明显变化。2.3肺W/D比值所有模型组W/D比值显著高于正常对照组（模型组与对照组，P=0.000；假手术模型组与对照组，P=0.000；去势手术模型组与对照组，P=0.000），去势手术模型组W/D比值较模型组明显降低（P=0.000），而假手术模型组中W/D比值与模型组相比差异无统计学意义（P=0.183）（表2）。2.4雄激素剥夺对肺组织中ENaC-α基因在转录水平的影响RT-PCR检测肺组织中ENaC-αmRNA的表达发现，所注：a，造模后6h呼吸频率；与正常对照组比较，P<0.01；b，与模型组相比，P<0.01；c，与假手术模型组比较，P>0.05表2肺湿重
文内图片：逆转录-聚合酶链反应检测各组大鼠肺组织ENaC-α亚基的mRNA表达Fig.2ExpressionofENaC-αmRNAinlungtissuesβ-actin207bp

逆转录-聚合酶链反应检测各组大鼠肺组织ENaC-α亚基的mRNA表达Fig.2ExpressionofENaC-αmRNAinlungtissuesβ-actin207bp

图片说明：重庆医科大学学报2014年第39卷第9期（JournalofChongqingMedicalUniversity2014.Vol.39No.9）有模型组其肺组织中ENaC-αmRNA的表达，都比正常对照组明显降低（模型组与正常对照组，P=0.000；假手术模型组与正常对照组，P=0.000；去势手术模型组与对照组，P=0.001）。而去势手术模型组，其肺组织中的ENaC-αmRNA的表达比模型组明显上调并具有统计学差异（P=0.002）；假手术模型组和模型组中的表达无统计学差异（P=0.940）（图2和表3）。2.5雄激素剥夺对肺组织中ENaC-α基因在翻译水平的影响通过Westernblot检查发现，所有模型组中肺组织中ENaC-α蛋白的表达比正常组明显降低（模型组与正常对照组，P=0.000；假手术模型组与正常对照组，，P=0.000；去势手术模型组与正常对照组，P=0.045）；而去势手术模型组，其肺组织中ENaC-α蛋白的表达比模型组明显上调并具有统计学差异（P=0.030）；假手术模型组与模型组中的表达无统计学差异（P=0.834）（图3和表3）。3讨论近来研究表明，在ALI/ARDS患者中，肺微血管通透性增加，富含蛋白质渗出液肺内聚集；其主要的病理改变是由肺内炎症细胞介导的肺内炎症失控导致肺泡毛细血管膜损伤，促进肺水肿聚集。清除肺泡内过多的液体，维持肺泡腔内相对干燥的环境，对有效的气体交换具有十分重要的意义，且在一定程度上决定了病情的转归，因此，研究各种影响ALI/ARDS肺泡水肿液清除的因素，对ALI/ARDS的治疗和预后具有重要意义。其中ENaC是由α、β、γ3种亚基构成，目前认为ENaC-α是ENaC的功能单位，是有效肺水肿必不可少的。大量临床及动物实验研究发现性别因素及性别激素在ALI/ARDS预后中扮演着重要作用，即：男性ARDS患者死亡率比女性高[4-5]，并其肺泡液体清除率比女
【作者单位】：重庆医科大学附属第一医院重症医学科;
【分类号】：R563.8

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