特发性肺纤维化中肺祖细胞增殖功能的调控

发布时间：2019-08-14 17:05

【摘要】：目的:本研究主要应用分子生物学和细胞生物学等手段,探讨在特发性肺纤维化中,肺祖细胞增殖功能的调控。方法:1.制备β-肌动蛋白-绿色荧光蛋白(β-actin-green fluorescent protein,β-actin-GFP)小鼠肺组织单细胞悬液。2.利用流式细胞术分选得到肺祖细胞,分别和正常人及特发性肺纤维化患者来源的肺成纤维细胞共培养,观察肺祖细胞的生长情况。3.应用TGF-β的受体抑制剂SB431542处理小鼠的肺成纤维细胞,测定其所分泌的成纤维细胞生长因子1(fibroblast growth factor 1,FGFl)和成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor2,FGF2)的变化。4.将小鼠肺祖细胞分别与小鼠肺成纤维细胞分泌的FGF1、FGF2、FGFl/FGF2混合液共培养,应用倒置显微镜观察FGFl、FGF2及FGFl/2混合液对肺祖细胞生长的影响作用。结果:1.利用流式细胞术分选得到的肺祖细胞和正常人来源的肺成纤维细胞共培养,8d后肺祖细胞克隆形成率为(3.5±1.1)%;而肺祖细胞和特发性肺纤维化患者来源的肺成纤维细胞共培养时,肺祖细胞的克隆量明显减少,克隆形成率仅为(0.04±0.04)%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。2.应用TGF-β的受体抑制剂SB431542处理小鼠的肺成纤维细胞24小时后,在荧光显微镜下可以观察到SB431542可上调肺成纤维细胞分泌的生长因子FGF1和FGF2的基因表达量,FGFlm RNA的表达量由对照组的0.0002上调到实验组的0.0055,FGF2 m RNA的表达量由对照组的0.0008上调到实验组的0.0015,两组数据具有统计学意义,而小鼠肺成纤维细胞的细胞形态没有明显变化。3.分别应用FGFl、FGF2及FGFl/2混合液单独培养小鼠肺祖细胞,8d后观察到小鼠肺祖细胞成功出现克隆,具有统计学意义。结论:在特发性肺纤维化发展过程中,成纤维细胞分泌的生长因子FGFl、FGF2可调控肺祖细胞的增殖功能。
【图文】：

图 1 流式细胞术分选小鼠肺祖细胞注：图 1.1 筛选出活细胞群图 1.2 在活细胞群中 CD31/34/45 APC-CY7 阴性、EpCAM-PE细胞是上皮细胞图 1.3 上皮细胞中 Sca-lAPC-A 及 GFP-FITC 双阳性的细胞是肺

图 2 肺祖细胞的增殖情况（共培养第 8 天）注：图 2.4-2.6 肺祖细胞和正常人肺成纤维细胞共培养 8d，应用倒置荧光显微镜下观察肺祖细胞的克隆形成(NHF 组)图 2.7-2.9 肺祖细胞和 IPF 患者肺成纤维细胞共培养 8d 后，，应用倒置荧光显微镜下观察肺祖细胞的克隆形成(IPF 组)
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R563

【参考文献】

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本文编号：2526685