体外实验中AGR2基因对MUC5AC表达的影响

发布时间：2019-09-02 14:25

【摘要】：研究背景气道粘液高分泌（airway mucushypersecretion）是慢性气道炎症性疾病的重要病理生理特征之一，也是目前呼吸系统疾病亟待解决的主要问题之一。由于目前粘液高分泌相关性疾病的普遍性和危重性，人们逐渐开始关注MUC，即粘蛋白。目前，已发现了21种粘蛋白，其中至少有12种在气道中表达。在病理状态下，气道粘蛋白的改变主要表现为由杯状细胞分泌的MUC5AC增加。许多粘液高分泌疾病，如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病（COPD）、支气管扩张、囊性纤维化（CF）等疾病的病理生理改变与MUC5AC的表达升高密切相关，所以研究粘蛋白MUC5AC表达的调控机制尤为重要。 AGR2(human anterior gradient-2，HAG-2或Gob-4)，是蛋白质二硫键异构酶家族（PDIs）的成员之一，是一个在人组织中广泛表达但功能尚不清楚的小分子分泌型蛋白。MUC2是肠道粘液的主要成分，动物实验研究发现AGR2与肠道粘液合成密切相关，其对肠道粘液产生是必不可少的。MUC5AC是气道粘液中最主要的组成部分，我们设想AGR2与气道粘液分泌也存在密切关系，所以我们采用NIC-H292细胞，给予CMV-Sport6-AGR2质粒转染细胞，检测气道粘蛋白MUC5ACmRNA及蛋白的表达情况，探讨AGR2对人气道上皮MUC5ACmRNA和MUC5AC蛋白表达的影响。研究目的观察CMV-Sport6-AGR2质粒转染人气道粘液上皮NCI-H292细胞后AGR2mRNA和MUC5ACmRNA的表达情况，同时检测粘蛋白MUC5AC的表达，探讨AGR2对人气道上皮MUC5ACmRNA和MUC5AC蛋白表达的影响。研究方法体外培养人气道粘液上皮癌细胞系NCI-H292细胞，予以不同浓度的CMV-Sport6-AGR2质粒转染NCI-H292细胞24h后，采用免疫细胞化学方法检测不同浓度的CMV-Sport6-AGR2质粒转染情况，即AGR2蛋白表达情况。选择最佳浓度的CMV-Sport6-AGR2质粒转染NCI-H292细胞，设为转染组，没有用CMV-Sport6-AGR2质粒转染的NCI-H292细胞设为对照组。采用逆转录-聚合酶链式反应（PT-PCR）技术检测两组细胞AGR2mRNA和MUC5AC mRNA的表达情况；免疫细胞化学SP染色法观察两组细胞MUC5AC蛋白的表达情况。研究结果 1.CMV-Sport6-AGR2质粒转染NCI-H292细胞的最佳浓度为1.33μg/ml，设此浓度的CMV-Sport6-AGR2质粒转染NCI-H292细胞为转染组。 2.CMV-Sport6-AGR2质粒转染NCI-H292细胞后AGR2mRNA和MUC5ACmRNA表达水平的变化： 2.1RT-PCR结果显示，CMV-Sport6-AGR2质粒转染NCI-H292细胞后AGR2mRNA表达阳性（0.61±0.05），而对照组未出现AGR2mRNA的表达，差异具有统计学意义（P＜0．01）。 2.2RT-PCR结果显示，CMV-Sport6-AGR2质粒转染NCI-H292细胞后MUC5ACmRNA表达量（0.85±0.09）较对照组（0.35±0.04）明显增多，差异具有统计学意义（P＜0．01）。 3.CMV-Sport6-AGR2质粒转染NCI-H292细胞后MUC5AC蛋白水平变化：免疫细胞化学结果发现，MUC5AC蛋白阳性信号定位在细胞浆中，细胞的胞浆染色呈黄色或黄褐色；对照组仅有少数细胞胞浆着色，CMV-Sport6-AGR2质粒转染NCI-H292细胞后MUC5AC染色明显增强呈阳性。转染组阳性细胞百分率（21.2±5）与对照组（2.6±0.4）相比有明显差异，，差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论AGR2可诱导人气道上皮细胞系NCI-H292细胞MUC5ACmRNA和MUC5AC蛋白过度表达，在气道粘液高分泌中起重要作用。
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R562.25

【参考文献】