中性粒细胞在COPD气道上皮间质转化中的作用及机制研究

发布时间：2019-09-25 02:21

【摘要】：慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Lung Disease, COPD)是呼吸系统的常见病和多发病,以气流受限不完全可逆为特征,同时伴有全身多系统损害的慢性炎症反应性疾病,与气道和肺组织对有害气体或颗粒产生过强的炎症反应有关。长期持续的慢性气道炎症的反复刺激引起的气道结构改变即气道重塑可导致气道狭窄、气流受限以及阻塞性通气功能障碍。中性粒细胞是参与COPD慢性气道炎症最为主要的炎性细胞之一,可通过释放弹性蛋白酶(NE)等多种活性物质直接或间接损伤气道组织,在COPD气道重塑中起到十分重要的作用。近期多项研究发现COPD患者气道上皮中存在上皮间质转化(EMT)的现象,而且EMT可能是气道肌成纤维细胞的主要来源之一。Thomas等报道中性粒细胞诱导的EMT与肿瘤密切相关。因此,我们推测中性粒细胞也能通过诱导上皮细胞发生EMT而参与COPD气道重塑的发生过程。本研究收集COPD患者以及非COPD患者肺组织手术标本,应用免疫组织化学和HE染色等技术分析中性粒细胞与气道EMT的相关性；通过A549与中性粒细胞共培养等体外实验探讨中性粒细胞在EMT的作用机制以及所涉及的信号通路。研究发现：1、COPD患者气道上皮细胞存在EMT现象：免疫组织化学提示气道上皮细胞的E-cadherin表达减少,同时vimentin表述增多；2、COPD患者气道中性粒细胞的浸润程度与E-cadherin表达呈负相关,与vimentin表达呈正相关；3、体外共培养中性粒细胞与A549细胞发现,中性粒细胞可诱导A549发生EMT,该现象并可被人Ⅳ型弹性蛋白酶抑制剂部分抑制。4、NE可以直接诱导A549细胞发生EMT并促进β-catenin由胞浆向胞核转移,应用Wnt/β-catenin通路小分子抑制剂XAV939预处理A549细胞能够抑制NE诱导EMT的作用。这些研究表明,中性粒细胞可能通过分泌NE诱导COPD患者气道EMT的发生,且这种作用是由Wnt/β-catenin途径介导的。
【图文】：

外周血,玻片,固定液,提拉

见紫色颗粒即为中性粒细胞，计数后发现中性粒细胞比例>90% (图IB)。Diff-Quik染色步骤：(1)将细胞制成单细胞悬液后涂片，待玻片干后放入固定液A液中固定15s;(2)从固定液中取出玻片直接放入红色染液B液中5-lOs，同时上下提拉玻片；(3)将玻片从B液中取出直接放入嗜碱性染液C液中5-10秒，同时上下提拉玻片；(4)放入清水中洗去染液，干燥。

图2 COPD患者支气管上皮细胞E-cadherin及Vimentin表达情况Figure2. Immunohistochemistry of human airway. Bronchial sections from non-COPD19
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.9

【参考文献】