口服卡介苗多糖核酸治疗哮喘大鼠免疫调节作用研究

发布时间：2019-09-30 18:17

【摘要】：目的： 建立大鼠慢性哮喘模型的基础上观察口服卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)干预后哮喘大鼠气道炎症、气道高反应性、脾脏CD4+CD25+Treg细胞数目、外周血清中工L-4和IFN-γ含量及肠粘膜sIgA含量的变化,探讨口服BCG-PSN防治哮喘的可行性及免疫调节作用。 方法： 1.取雄性成年SD大鼠(体重160±20g)50只,分为五组：对照(Control)组、模型(Model)组、口服卡介苗(BCG)组、口服BCG-PSN组即BCG-PSN(A)组和肌注BCG-PSN组即BCG-PSN(B)组,各组10只。2.除Control组以外的其余四组大鼠分别于实验第1天和第15天腹腔注射10%OVA混合液lml(含OVA100mg、氢氧化铝100mg)致敏。第21天后再进行激发,2%OVA2ml泵雾化吸入,每周3次,激发连续9周,构建大鼠慢性哮喘模型,Control组致敏和激发均以生理盐水代替。 3.药物干预从实验的第1天起开始,BCG组予BCG灌胃(50ug／次,2次／周,12周)；BCG-PSN (A)组予BCG-PSN灌胃(250ug/kg·次,2次／周,12周)；BCG-PSN(B)组予BCG-PSN肌注(45ug/kg·次,2次／周,12周)。 4.末次激发24小时内麻醉动物,气管插管后行气道高反应性(airway hyper responsiveness,AHR)检测；制备脾细胞悬液,通过流式细胞学检测脾脏CD4+CD25+Treg细胞数目变化,了解BCG-PSN对调节性T细胞的影响；采用ELISA法检测外周血清中IFN-γ和工L-4及肠道粘膜sIgA的含量,明确口服BCG-PSN对TH1/TH2细胞因子平衡及局部黏膜免疫的调节情况；腹主动脉放血处死大鼠,取各组动物BALF测定炎性细胞总数和EOS百分比,并行肺脏组织病理学检查。 结果： 1.大鼠慢性哮喘模型的建立：与Control组相比,在激发过程中,Model组大鼠逐渐出现烦躁不安、呼吸急促、挠鼻、发绀、活动进食减少或俯卧不动、出现竖毛、毛发失去光泽甚至脱毛、反应迟滞等哮喘样表现；同时Model组大鼠动物气道高反应性测定显示气道阻力明显增高,与Control组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且肺组织病理显示：Model组气道周围有大量炎症细胞浸润,支气管管壁增厚、管腔狭窄,气道上皮细胞脱落,粘液分泌明显增加。BALF细胞学显示炎性细胞总数及EOS百分比与Control组比较明显增加(P0.05),提示哮喘大鼠模型复制成功。 2.各组大鼠气道高反应性值变化：各组大鼠用盐酸组胺激发,盐酸组胺浓度从0.32mg/ml起,Model组、BCG组、BCG-PSN(A)组和BCG-PSN(B)组气道阻力均明显高于Control组(P＜0.05),差异有统计学意义。而组胺浓度从0.64mg/ml起,BCG-PSN(A)组气道阻力明显低于Model组(P0.05),差异有统计学意义；但明显高于BCG-PSN(B)组(P＜0.05),差异有统计学意义,而与BCG组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。 3.各组大鼠病理组织学变化：Model组气道周围炎症改变明显、支气管管壁增厚、管腔狭窄,气道上皮细胞脱落,粘液分泌明显增加。BCG-PSN(A)组、BCG组及BCG-PSN(B)组与Model组相比,气道周围炎症明显减轻,气道周围炎症细胞浸润、气道分泌物减少、支气管壁增厚及上皮细胞脱落现象明显改善。 4. BALF细胞学变化：BCG-PSN(A)组炎性细胞总数及EOS百分比明显低于Model组(P＜0.05),但明显高于BCG-PSN(B)组(P＜0.05),差异有统计学意义；而与BCG组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。 5.外周血清中工FN-γ、IL-4含量：致敏、激发后Model组血清中IL-4的含量较Control组明显升高(P0.05),IFN-γ的含量较Control组显著降低(P0.05)；BCG-PSN(A)组工L-4含量明显低于Model组(P0.05),而IFN-γ的含量明显高于Model组(P0.05)；BCG-PSN(A)组IFN-γ含量明显低于BCG-PSN(B)组(P0.05),而与BCG组相比差异无统计学意义(P0.05)。而BCG-PSN(A)组、BCG组与BCG-PSN(B)组三者之间血清IL-4的含量两两比较差异无统计学意义(P＞0.05)。 6.脾脏CD4+CD25+Treg/CD4+T细胞百分比：致敏、激发后Model组脾脏CD4+CD25-Treg/CD4+T细胞百分比较Control组明显降低(P＜0.05)；BCG-PSN(A)组明显高于Model组(P＞0.05),但显著低于BCG-PSN(A)组(P＜0.05),与BCG组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。 7.肠粘膜sIgA含量：Control组、Model组、BCG组、BCG-PSN(A)组和BCG-PSN(B)组相互之间sIgA含量差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论： 1.OVA致敏,激发能够成功构建大鼠慢性哮喘模型。 2.口服BCG-PSN能够降低哮喘大鼠气道高反应性,部分抑制气道炎症、抑制EOS的募集。 3.口服BCG-PSN能升高血清中IFN-γ含量,降低血清中IL-4的含量,可调节THl/TH2平衡；哮喘大鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞数目下降,口服BCG-PSN干预CD4+CD25+Treg细胞数目上升. 4.口服BCG-PSN与肌注BCG-PSN在调节机体免疫方面有类似的作用,但其程度弱于肌注BCG-PSN。
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R562.25

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本文编号：2544409