基因芯片法快速检测结核分枝杆菌KatG、inhA和rpoB基因突变及其与INH和RFP耐药相关性的研究

发布时间：2019-10-22 15:18

【摘要】：由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)感染引起的肺结核(Pulmonary tuberculosis, PTB)是世界范围内的重大流行病和传染病。抗结核常规有效药物异烟肼(INH)、利福平(RFP)等对耐多药(Multiple drug resistant-tuberculosis, MDR-TB)及广泛耐药结核的治疗是无效的,对此类肺结核的早期、快速和灵敏诊断有利于临床采取有效、合理的治疗药物与方案。利用基因芯片技术对耐多药结核的诊断具有快速,灵敏和高通量等许多优点。 采用罗氏固体培养法对结核分枝杆菌进行传统药敏试验；利用博奥公司生产的晶芯⑧结核分枝杆菌耐药检测试剂盒和相关仪器通过核酸提取、PCR扩增、芯片杂交与清洗和芯片扫描,分别对结核分枝杆菌的INH和RFP耐药相关基因KatG315、inhA-15和rpoB常见突变位点进行检测和药敏判断；通过抽提结核分枝杆菌基因组DNA,采用PCR扩增KatG和rpoB基因片段,核酸电泳鉴定后进行纯化和测序；将基因芯片检测的耐药情况与传统药敏试验结果的一致性进行分析,并将基因芯片法检测的位点突变情况与DNA测序结果进行比较分析。 基因芯片法的研究结果表明：(1)相对于inhA-15突变(C→T),苏州地区结核分枝杆菌INH耐药相关基因KatG主要突变形式为(AGC→ACC) Ser→Thr(S315T),占耐药突变总比例的96.3%；以罗氏固体培养法获得的INH耐药结果为标准,基因芯片法对菌株INH药敏检测的准确率为73.8%；以DNA测序法结果为标准,基因芯片法对KatG315突变型检测的准确率为88.9%。(2)苏州地区结核分枝杆菌RFP耐药相关基因rpoB主要突变形式为RRDR-531(TCG→TTG) Ser→Leu为主要突变形式,占检测标本rpoB-RRDR相关位点总突变的76.9%；以罗氏固体培养法获得的RFP耐药结果为标准,基因芯片法对菌株药敏检测的准确率为93.3%；以DNA测序结果为标准,基因芯片法对rpoB基因的RRDR相关位点的检测的准确率为82.4%。上述研究获得部分的结果已整理成文,并在投稿中。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R521

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