穿心莲内酯抗香烟引起的HBE细胞炎症反应的机制研究与临床观察

发布时间：2019-10-28 19:04

【摘要】：目的:本研究以香烟烟雾暴露的HBE(人肺泡上皮)细胞为模型,验证穿心莲内酯是否通过调控miR-218的表达来缓解香烟引起的上皮细胞炎症反应;临床上通过观察穿心莲内酯治疗急性加重期慢性阻塞性肺疾病(AECOPD)的炎症抑制作用,进而揭示穿心莲内酯在预防吸烟引起的肺部炎症反应中有临床意义。方法:第一部分穿心莲内酯对HBE细胞的抗炎作用研究1.1穿心莲内酯对CSE-HBE细胞促炎症细胞因子表达的影响采用CSE预处理,构建炎症反应的HBE细胞模型,将细胞分为四组,分别是CSE组、CSE+穿心莲内酯组、CSE+PBS组及空白对照组。各组细胞用蛋白分离盒分离核蛋白及胞浆蛋白,通过ELISA测定TNF-α、IL-6和IL-8的表达水平。1.2 CSE-HBE细胞中穿心莲内酯对miR-218表达的影响将HBE细胞分四组,为CSE组、CSE+穿心莲内酯组、CSE+PBS组及空白对照组,使用RT-PCR测定上述细胞内的miR-218含量。1.3 CSE-HBE细胞中miR-218 inhibitor对TNF-α、IL-6和IL-8表达的影响将HBE细胞仍分四组,为CSE组、CSE+穿心莲内酯组、CSE+穿心莲内酯+anti-miR-218组及空白对照组。各组细胞用蛋白分离盒分离核蛋白和胞浆蛋白,通过ELISA测定各组细胞内TNF-α、IL-6和IL-8表达。第二部分穿心莲内酯治疗AECOPD患者的临床观察随机将100例中、重度的AECOPD患者分为对照组及治疗组,各50例。对照组给予常规抗感染+对症治疗,治疗组另加用穿心莲内酯;治疗5天比较两组患者血气PO2、PCO2,FEV1%pred以及ELISA法检测诱导痰液和血清TNF-α、IL-6及IL-8含量。结果:第一部分穿心莲内酯对COPD的抗炎作用研究1.1穿心莲内酯对CSE-HBE细胞促炎症细胞因子表达的影响各CSE组中,TNF-α、IL-6和IL-8表达均比空白组明显上升;在CSE各组间进行炎症因子表达差异比较:穿心莲内酯组与未用药组其表达明显降低。1.2 CSE-HBE细胞中穿心莲内酯对miR-218表达的影响各CSE组内,miR-218表达量与空白对照组比为明显降低,miR-218的表达量在预穿心莲内酯组细胞与其他CSE组相比则有显著增加。1.3 CSE-HBE细胞中miR-218 inhibitor对TNF-α、IL-6和IL-8表达的影响各CSE组中,三种炎症因子水平较空白组为明显上升;穿心莲内酯组与未行预处理的CSE组比则明显降低;穿心莲内酯降低炎症因子的能力则明显降低,在miR-218沉默后。第二部分穿心莲内酯治疗AECOPD患者的临床观察与对照组相比,穿心莲内酯治疗5天的治疗组患者PO2、FEV1%pred数值显著升高,PCO2显著降低(P0.05);血液和痰液中TNF-α、IL-6及IL-8水平显著降低(P0.05)。结论:miR-218的表达可被穿心莲内酯处理后表达上调,阻碍CSE-HBE细胞中的炎症因子(TNF-α、IL-6和IL-8)表达,达到减轻CSE-HBE细胞的炎症反应作用。临床方面,穿心莲内酯通过降低炎症因子水平从而减轻急性加重期慢性阻塞性肺疾病患者气道炎症。
【图文】：

图 1-4 各组 HBE 细胞中的 TNF-α、IL-8 和 IL-6 的表达含量1.1.5结论本实验结果表明，香烟烟雾能诱导 HBE 细胞内的炎性因子分泌量增加，而预先用穿心莲内酯处理的 CSE-HBE 细胞的炎性因子表达量却有减少的作用，这能说明穿心莲内酯可减少 CSE-HBE 细胞内的炎症发生的可能，有抗炎的作用。1.1.6讨论COPD 的主要的病理特征是不完全可逆的气流受限与小气道内弹性回缩力下降；实质性结果为动态肺顺应性（最大呼气第一秒呼出的气量的容积，FEV1）的逐年减少，肺排空量不足，导致肺静态和动态容量增大。暴露在香烟烟雾中导致肺组织内多种炎性细胞病理性增多，纤毛上皮破损引起粘液分泌增多，肺血管上皮细胞损伤，肺泡上皮细胞病理性增生，引起肺泡内细胞反复炎症性修复，胶原含量增加及疤痕形成，从而引起气道壁结构及肺泡细胞的损伤，，最终导致细支气管壁增厚或重建（图 a）[8]。阻塞性细支气管炎及肺实质损伤是 COPD

图 1-5 各组细胞中 miR-218 的表达量1.2.5结论穿心莲内酯促进香烟烟雾引起的肺上皮细胞的 miR-218 的表达。1.2.6讨论miRNAs 是一类内源性、非编码的单链小 RNA，其广泛存在于植物、线虫乳动物及人类的细胞中[23]；据 miRNA 知名数据库（miRase http://www.mirbarg/）最新数据示：在 223 个物种中共发现 35828 条 miRNA。miRNAs 合成是一个多层次、多步骤的复杂过程。miRNAs 首先在细胞核过 RNA 多聚酶Ⅱ转录为初级转录产物 miRNA，接着被 RNase Ⅲ Drosha 酶NA 酶内切酶等切割为 miRNA 前体（pre-miRNAs），紧接着就被转移至细胞，由 RNase Ⅲ Dicer 酶等进一步切割加工成约 22nt 的双链 miRNA 复合物链 miRNA 复合物形成后，其中一条链(Passenger 链)被降解，另一条则经过的生物过程逐渐成熟。被保留的这条链成熟为 Guide 链并结合至 RIS[24-26]
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R563

【参考文献】

相关期刊论文 前5条

1 尹青;邓明明;;穿心莲内酯抗炎作用机制研究进展[J];广东医学;2014年05期

2 ;慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2013年修订版)[J];中国医学前沿杂志(电子版);2014年02期

3 吕巧莉;涂国刚;王嘉琦;李少华;;穿心莲内酯的研究进展及临床应用[J];南昌大学学报(医学版);2013年01期

4 刘改芝;徐海伟;孙凯;王君;刘宏民;;穿心莲内酯衍生物的合成研究进展[J];有机化学;2008年02期

5 刘新建,王一飞,李贵生;穿心莲内酯及其衍生物的药理研究进展[J];中药材;2003年02期

本文编号：2553174