异钩藤碱抑制PDGF-BB诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

发布时间：2019-11-10 19:55

【摘要】：目的探讨异钩藤碱对血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及其机制。方法建立PDGF-BB诱导的PASMCs增殖模型,通过MTT比色法和台盼蓝拒染法检测异钩藤碱对PASMCs增殖的影响及细胞毒性,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞周期相关蛋白的表达及血小板源性生长因子受体β(PDGF-Rβ)信号通路蛋白表达及磷酸化的影响。结果与正常对照相比,加入PDGF-BB(20 ng/m L)培养24 h,可促进PASM Cs增殖约2.5倍;异钩藤碱剂量依赖性地抑制PDGF-BB诱导的PASM Cs增殖;异钩藤碱(25μmol/L)明显抑制PDGF-BB诱导的S期细胞比例升高;Western blotting结果显示,异钩藤碱可抑制PDGF-BB诱导的cyclin D1、CDK6的表达和p27kip1的降解,下调PDGF-Rβ及其下游信号分子AKT、糖原合成激酶(GSK)3β的磷酸化。结论异钩藤碱通过将细胞周期阻滞于G0/G1期来抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,其机制可能为通过抑制PDGF-Rβ及其下游信号通路的磷酸化、进而调节细胞周期相关蛋白的合成和降解来实现。
【图文】：

in，刮勺收集蛋白，BCA法测定提取蛋白浓度。经SDS-PAGE凝胶电泳后，转移至PVDF膜上，用5%牛血清白蛋白室温封闭1h后，加入相应的抗PDGF-Ｒβ、P-PDGF-Ｒβ、AKT、P-AKT、GSK3β、P-GSK3β、cyclinD1、CDK6、p27kip1抗体4℃过夜，TBST洗膜后，加入辣根过氧化物酶标记的IgG抗体，室温作用1h，TBST洗膜后，，滴加ECL发光试剂检测蛋白。1．3统计学处理采用SPSS16．0软件，数据以xs

本文编号：2559008