过继转移日本血吸虫感染小鼠CD8α~-树突状细胞通过IL-10抑制OVA诱导的过敏性哮喘

发布时间：2017-03-22 10:15

  本文关键词：过继转移日本血吸虫感染小鼠CD8α~-树突状细胞通过IL-10抑制OVA诱导的过敏性哮喘，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探究日本血吸虫(SJ)感染小鼠哪种树突状细胞(DC)亚群对抑制OVA诱导的过敏性哮喘有关键作用,并研究其抑制作用的机制。方法:取SJ感染小鼠和正常小鼠各10只,采用MACS方法从脾脏中提取CD8α+DC和CD8α-DC,分别表示为:NCD8α+DC,NCD8α-DC,SJCD8α+DC,SJCD8α-DC。另取24只小鼠,随机分为4组:Normal组、Asthma组、SJCD8α+组和SJCD8α-组。SJCD8α+组:过继转移SJCD8α+DC后,用OVA诱发哮喘的小鼠;SJCD8α-组:过继转移SJCD8α-DC后,用OVA诱发哮喘的小鼠;Asthma组:不过继转移DC,仅与SJCD8α+组和SJCD8α-组小鼠在同一时间用OVA诱发哮喘的小鼠;Normal组:正常对照小鼠,不过继转移DC,也不诱发哮喘。对SJCD8α+组、SJCD8α-组和Asthma组小鼠诱发哮喘结束后,处死各组小鼠。1.取肺组织,制作石蜡切片,HE染色后,观察各组小鼠肺组织病理变化。2.分别提取NCD8α+DC,NCD8α-DC,SJCD8α+DC,SJCD8α-DC的总RNA,反转录为c DNA,采用q-PCR的方法检测DC亚群IL-12和IL-10 m RNA水平。3.收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF),用ELISA法检测各组小鼠BALF中IL-10蛋白水平。4.取各组小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,在一定浓度OVA的刺激下,对脾细胞进行体外培养。72h后,收集脾细胞培养上清(SCS),用ELISA方法检测各组小鼠SCS中IL-10蛋白水平。结果:1.与Asthma组小鼠相比,SJCD8α+组小鼠肺组织病理性炎症减轻:肺间质仍有炎细胞浸润,支气管管腔可见黏液潴留,但管壁较完整,增厚不明显。然而,与Asthma组和SJCD8α+组小鼠相比,SJCD8α-组小鼠肺组织病理性炎症明显减轻:肺间质炎性细胞浸润明显减轻,支气管管壁完整,增厚不明显,管腔内黏液潴留少见。过继转移SJCD8α-DC对过敏性哮喘的抑制作用强于SJCD8α+DC。2.NCD8α+DC、NCD8α-DC、SJCD8α+DC和SJCD8α-DC的IL-12 m RNA水平分别为23.14±0.40、18.74±2.92、37.96±1.36和25.34±4.31(GAPDH%),SJCD8α-DC IL-12 m RNA表达水平低于SJCD8α+DC(P0.01),与NCD8α+DC、NCD8α-DC相比无明显差异。NCD8α+DC、NCD8α-DC、SJCD8α+DC和SJCD8α-DC的IL-10 m RNA水平分别为79.74±1.39、89.50±13.95、103.17±3.69和172.68±29.39(GAPDH%),SJCD8α-DC IL-10mRNA表达水平高于NCD8α-DC和SJCD8α+DC(P0.05,P0.05)。3.Normal组、Asthma组、SJCD8α+组和SJCD8α-组小鼠SCS中IL-10蛋白水平分别为(142.23±11.96)pg/ml、(164.42±26.47)pg/ml、(254.16±26.28)pg/ml和(841.53±9.49)pg/ml。SJCD8α-组小鼠SCS中IL-10蛋白表达水平明显高于Normal组、Asthma组和SJCD8α+组(P0.001,P0.001,P0.001)。4.Normal组、Asthma组、SJCD8α+组和SJCD8α-组小鼠BALF中IL-10蛋白水平分别为(151.63±10.40)pg/ml、(144.54±10.18)pg/ml、(202.88±30.98)pg/ml和(411.21±7.81)pg/ml。SJCD8α-组BALF中IL-10蛋白水平明显高于Normal组、Asthma组和SJCD8α+组(P0.001,P0.001,P0.001)。结论:1.SJCD8α-DC对OVA诱导的过敏性哮喘的抑制有关键作用。2.SJCD8α-DC是耐受型DC。3.SJCD8α-DC通过增加IL-10表达量抑制过敏性哮喘。
【关键词】：日本血吸虫 过敏性哮喘 树突状细胞 IL-10 调节性T细胞
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25;R532.21
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 对象和方法14-35
• 1 实验准备14-16
• 1.1 阳性钉螺14
• 1.2 实验动物14
• 1.3 主要试剂14-15
• 1.4 主要仪器设备15
• 1.5 液体配制15-16
• 2 实验方法16-35
• 2.1 建立日本血吸虫感染小鼠模型16-17
• 2.2 提取DC亚群17-20
• 2.3 流式细胞术检测DC纯度20
• 2.4 建立实验动物模型20-21
• 2.5 取材21-25
• 2.6 肺组织病理学检查25-27
• 2.7 树突状细胞亚群IL-12和IL-10 mRNA表达量的检测27-32
• 2.8 支气管肺泡灌洗液和脾细胞培养上清中IL-10蛋白水平的测定32-34
• 2.9 统计学分析34-35
• 结果35-41
• 1 小鼠肺组织病理变化35-36
• 1.1 Normal组小鼠肺组织病理35
• 1.2 Asthma组小鼠肺组织病理35
• 1.3 SJCD8α+组小鼠肺组织病理35-36
• 1.4 SJCD8α-组小鼠肺组织病理36
• 2 树突状细胞亚群IL-12和IL-10 mRNA表达量36-38
• 3 小鼠脾细胞培养上清中IL-10蛋白水平38-40
• 4 小鼠支气管肺泡灌洗液中 IL-10 蛋白水平40-41
• 讨论41-44
• 1 关于SJCD8α-DC是抑制过敏性哮喘的关键DC亚群的讨论41
• 2 关于SJCD8α-DC功能类型的讨论41-42
• 3 关于SJCD8α-DC通过IL-10抑制过敏性哮喘的讨论42-43
• 4 研究的意义与展望43-44
• 结论44-45
• 参考文献45-51
• 发表论文和参加科研情况说明51-52
• 附录52-54
• 综述 IL-10和调节性T细胞对哮喘作用的研究进展54-69
• 综述参考文献61-69
• 致谢69

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