miRNA-146a、miRNA-185在胸腔积液中临床价值的研究

发布时间：2020-04-05 13:03

【摘要】：研究目的:本实验通过收集临床上恶性胸腔积液(malignant pleural effusion MPE)和良性胸腔积液(benign pleural effusion BPE)的胸水标本,检测miRNA-146a、miRNA-185在MPE及BPE患者胸水中的相对表达水平,评估miRNA-146a、miRNA-185在临床鉴别诊断MPE及BPE的效能。研究方法:采用实时荧光定量PCR技术检测40例MPE及41例BPE患者胸水中miRNA-146a、mi RNA-185两种miRNA的相对表达量,运用两独立样本的Mann-Whitney U秩和非参数检验验证两种miRNA在良恶性胸腔积液中差异表达是否有统计学意义。通过构建胸水miRNA-146a、mi RNA-185的受试者工作曲线(ROC曲线),分别计算出miRNA-146a、miRNA-185诊断肺癌相关的MPE的敏感性、特异性和准确性,并与临床上应用成熟的肿瘤标记物癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen CEA)及细胞角蛋白19片段(Cytokeratin 19 fragment Cyfra21-1)进行比较,根据受试者工作曲线下面积(AUC)评估miRNA-146a、miRNA-185诊断MPE的效能。研究结果:1、实时荧光定量PCR技术显示mi RNA-146a、miRNA-185两种miRNA在MPE及BPE患者的胸水中存在明显的差异性表达(P0.01),实验数据表明miRNA-146a、miRNA-185两种miRNA在肺癌合并MPE患者的胸水中的表达量显著低于BPE患者的胸水。2、ROC曲线显示miRNA-146a的曲线下面积(AUC)为0.816(95%可信区间0.713~0.919),敏感性为0.850,特异性为0.805。miRNA-185的AUC为0.826(95%可信区间0.729~0.924),其敏感性0.800,特异性0.854。两种miRNA的AUC均低于CEA的0.928(95%可信区间0.861~0.996),但高于CYFRA21-1的0.734(95%可信区间0.615~0.854)。mi RNA-146a的诊断的敏感性均高于CEA及CYFRA21-1,miRNA-185的诊断敏感性高于CYFRA21-1低于CEA,但它们的特异性较CEA及CYFRA21-1均降低。两种mi RNA联合诊断的AUC为0.814(95%可信区间0.713~0.915),低于miRNA单独诊断时的AUC。同样,两种miRNA联合诊断的敏感性为0.763,较miRNA单独诊断的敏感性降低,而特异性为0.842,高于miRNA-146a,但低于mi RNA-185。miRNA-146a联合CEA诊断的AUC为0.925(95%可信区间0.857~0.992),mi RNA-185联合CEA诊断的AUC为0.924(95%可信区间0.856~0.992),较任一种mi RNA单独诊断的效能提高。两种miRNA共同联合CEA诊断恶性胸腔积液的AUC为0.922(95%可信区间0.844~1.000),较任一种mi RNA联合CEA的效能无明显增高。3、实验数据表明在肺癌合并MPE患者的胸水中miRNA-146a、miRNA-185的表达量与恶性胸水患者的临床参数年龄、性别、吸烟史均无明显的相关性(P0.05)。结论:在胸腔积液中均检测到miRNA-146a、miRNA-185两种miRNA的表达;miRNA-146a、mi RNA-185两种mi RNA在MPE患者胸水中的表达量显著低于BPE患者(P0.01);miRNA-146a、miRNA-185两种miRNA有可能协助临床上鉴别诊断恶性胸腔积液的无创标记物。
【图文】：

扩增曲线,胸腔积液,标本

间的标本逆转录 cDNA，OD 值小于 1.8 多提示标本中可能存在蛋白质污染，而标本的 OD 值大于 2.0 多提示 RNA 可能存在降解。每个标本测量需重复三遍，取三次实验测得标本浓度平均值。3.2 胸腔积液中 miRNA-146a、miRNA-185 及内参 U6 的荧光定量 PCR 的扩增及溶解曲线如图 3.2.1、3.2.3、3.2.5 所示，miRNA-146a、miRNA-185 及内参基因 U6 在同等条件下行实时荧光定量 PCR 后，仪器自动收集的荧光信号曲线图。如图所示的一条水平直线表示各基因扩增后的阈值，而该直线与个基因的扩增曲线相交的横坐标为各基因的 CT 值。图 3.2.2、3.2.4、3.2.6 为各基因对应的溶解曲线，各溶解曲线均只有一个波峰，若出现双波峰的溶解曲线，，说明所扩增产物不是本实验所要求的产物，每个扩增曲线的波峰所对应的解链温度均高于 80℃。

溶解曲线,胸腔积液

2胸腔积液中miRNA-146a的溶解曲线
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R561.3

【参考文献】