脂多糖结合蛋白对内毒素性肺损伤的调节作用及机理研究

发布时间：2020-04-09 23:44

【摘要】： 革兰阴性菌外膜的脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）是引起全身炎性反应综合征（systemic inflammatory response syndrome, SIRS）、急性肺损伤（acute lung injury, ALI）和急性呼吸窘迫综合症（acute respiratory distress syndrome, ARDS）的重要原因，而脂多糖结合蛋白（lipopolysaccharide binding protein, LBP）对LPS的致病性具有重要的调节作用。LPS侵入机体后，首先在LBP介导下，与单核巨噬细胞膜上的LPS受体结合，由膜受体将LPS信号传入细胞内。在细胞质中，组成信号通路的一系列蛋白激酶被依次磷酸化，最终激活转录因子，并由转录因子启动细胞因子和炎性介质的基因表达，进而导致一系列病理过程。有关LBP对LPS调节作用的早期研究显示：LBP可加速LPS与受体CD14的结合而增敏LPS对靶细胞的作用。但最近有人观察到：LBP还可促进LPS与高密度脂蛋白或巨噬细胞膜上清除受体（scavenger receptor, SR）的结合而加速LPS的清除，从而减轻LPS的毒性作用。目前就LBP对LPS不同调节作用的机制仍不清楚。本研究围绕LBP对LPS的调节作用，从以下三个方面进行了研究：第一，经50％饱和硫酸铵溶液盐析、Bio-Rex70阳离子交换层析和MonoQ 阴离子交换层析，从大鼠急性反应期血清中分离、纯化LBP，为进一步研究LBP对LPS的调节机制奠定基础。第二，采用RT-PCR和Western- blotting，观察LPS在诱导肺泡巨噬细胞中TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA 表达及p38MAPK蛋白激酶活化的过程中，LBP对LPS调节作用的时间和剂量依赖性，从细胞内信号传导和基因转录水平探讨LBP对LPS的调节机制。第三，用油酸和LPS复制一次打击和二次打击的大鼠急性肺损伤模型，观察LBPmRNA的动态变化及山度若碱的保护作用，探讨LBP 在体内对LPS的增敏效应及山莫蓉碱的保护机制。研究结果显示：①从300ml大鼠急性反应期血清中分离、纯化到762 u g大鼠 LBP，纯化倍数达 1570倍。纯化的大鼠 LBP在 SDS－PAGE的 60kD 处呈单一条带，，并可明显增强 FITC毛PS与外周血单个核细胞（PBMC）的结合。②当 LPS为 0刀 ling几，LBR为 ling／L以下时，各细胞因子 mRNA 的表达随 LBP浓度的增加而增高，而 10mg／L LBP对各细胞因子 mRNA 表达的上调作用反而有所减弱；当 LPS浓度为 ling几时，不同浓度的 LBP 对LPS诱导肺泡巨噬细胞中细胞因子mRNA的表达无影响。＠在各时相点，LBP对 0乃ling／L的 LPS均有明显的调节作用，而对 ling／L 的 LPS 无调节作用。④LPS刺激15min后，p38MAPK的磷酸化活性开始增高， 30min达峰值，60min后下降。LPS浓度为 0．cling／L时，LBP对 LPS激活 P38MAPK信号通路有明显的增强和调节作用；LPS浓度为 ling／L时， LBP对LPS激活p38 MAPK无调节作用。⑤用油酸实施一次打击，可使肺组织中LBP的表达明显增高。在此基础上予小剂量LPS进行二次打击后，肺组织中 TNF＊和 ILJ 0的表达增高；山度若碱干预可抑制 LBP的上调，减少 TNF·口和 IL刁 0的表达，病理改变也明显减轻。以上结果表明：①用50％饱和硫酸铰沉淀、Bio．Rex70阳离子交换层析和MonoQ预装柱的阴离子交换层析，可从大鼠急性反应期血清中纯化到具有生物学活性的LBP。②LBP对LPS的调节作用具有明显的剂量依赖性，无时间依赖性。＠LBP可影响 LPS对 p38 MAPK信号通路的激活，这是LBP对LPS发挥调节作用的一个重要机制。④一次打击后LBP的反应性上调是机体对二次打击敏感性增加的重要原因。山度著碱可通过抑制LBP的过度表达，阻断LBP对LPS的增敏作用，从而发挥其对内毒素性肺损伤的防治作用。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R563.8

【参考文献】