Elafin重组气道上皮细胞与细菌生物膜的相互作用

发布时间：2020-04-11 10:09

【摘要】： 目的:观察天然抗菌多肽Elafin重组气道上皮细胞与铜绿假单胞菌生物膜的相互作用以及对细菌生物膜作用的异质性。 方法:(1)体外细胞培养气道上皮A549细胞,将已构建好的含有绿色荧光蛋白标记的pEGFP-N1-elafin表达载体通过脂质体转染系统(LipofectamineTM 2000)进行A549细胞转染重组,倒置荧光显微镜观察其重组效率。(2)体外平板法制备铜绿假单胞菌生物膜(BF)模型7天后,用银染法以及扫描电镜鉴定BF的形成。(3)设转染未含Elafin基因空载体的A549细胞作为对照组、重组后的A549细胞(转染未诱导组)、猪胰弹力蛋白酶诱导(NE组)、铜绿假单胞菌上清诱导(Pa组,实验组),各孵育48h后,分别采用ELISA技术和Western Blot检测各组上清液中Elafin的分泌水平和细胞内Elafin的含量;将铜绿假单胞菌BF载体放入四组细胞中继续孵育8小时后取出:①于4、8、12、24小时等4个时相点观察细胞形态的破坏率,②于8小时用MTT法测定细胞上清液中细菌存活数,③同时四组载体经银染后用图像分析系统进行BF的形态测量、后三组载体采用扫描电镜观察各组BF的形态改变情况,以观察重组气道上皮细胞与铜
【图文】：

2.2 Elafin 转染后细胞的表达情况通过 LipofectamineTM 2000 将 Elafin 克隆载体重组到 A549 细胞中，，在荧光倒置显微镜下观察到部分细胞出现绿色荧光计数显示转染效率约为 35%（图 1-2），空载体质粒对照组则没有什么荧光 (图 1-3) 。图 1-1 转染前的 A549 细胞(×200)Fig 1-1 A549 cell before transfected(×200）

2.2 Elafin 转染后细胞的表达情况通过 LipofectamineTM 2000 将 Elafin 克隆载体重组到 A549 细胞中，在荧光倒置显微镜下观察到部分细胞出现绿色荧光计数显示转染效率约为 35%（图 1-2），空载体质粒对照组则没有什么荧光 (图 1-3) 。图 1-1 转染前的 A549 细胞(×200)Fig 1-1 A549 cell before transfected(×200）
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R56

【参考文献】

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1 小林宏行;细菌菌膜的基础与临床[J];中国临床药理学杂志;1999年04期

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3 周向东,童瑾,兰箭;慢性阻塞性肺疾病患者气道粘蛋白分子表型的研究[J];中华结核和呼吸杂志;2002年07期

4 陈迁,王睿,方向群,刘又宁,黄蓓;罗红霉素与氟罗沙星联合应用对铜绿假单胞菌生物被膜的影响[J];中华医学杂志;1999年10期

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本文编号：2623468