II类主要组织相容性抗原在肺纤维化的表达及其机制探讨

发布时间：2020-04-15 11:20

【摘要】： 肺纤维化是一组由多种病因所引起的间质性肺疾病,是许多慢性肺病的共同结局。其病理特点包括肺泡上皮损伤、肺成纤维细胞积聚以及细胞外基质的过度沉积,最终导致不可逆性损伤。肺纤维化病因复杂、发病机制尚不明确。近年研究表明,免疫机制参与了肺纤维化的发病。主要组织相容性抗原(MHC)II类分子是抗原呈递细胞将外源性抗原提呈给CD4+Th细胞的必要载体,同时影响着T细胞的选择、免疫耐受的诱导及抗体产生等,是机体免疫反应的关键环节。II类反式激活蛋白(CIITA)是MHC II类分子表达的限速因子,人白细胞抗原(HLA)-DR是经典的MHC II类抗原。MHC II类抗原在靶器官的异常表达是组织特异性炎症免疫性疾病的重要标记。研究表明,MHC II类分子参与了肝、肾纤维化的发病过程。MHC II类分子参与肝脏纤维化的机制可能是MHC II类分子相关的抗原呈递导致B细胞的分化,由此产生高免疫球蛋白血症;而在肾脏则认为与MHC II类分子的抗原呈递作用刺激初始T细胞的特异性免疫应答,Th1/Th2极化失衡有关。MHC II类分子与肺纤维化之间的关系目前尚不清楚。目的:在博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型上,观察肺组织MHC II类分子及其上游调控因子CIITA表达水平的变化,临床实验观察HLA-DR在特发性肺纤维化的表达,探讨MHC II类分子在肺纤维化发病中可能的病理生理意义。方法:(1)雄性Wistar大鼠20只,随机分为对照组、肺纤维化组(经气管内注入BLMA5 5mg/kg),分别于造模后第7天、28天取肺组织行HE染色、Masson染色,并依据szapiel方法对肺部病变进行半定量评分;生化方法检测肺组织羟脯氨酸含量;(2)免疫组化染色观察大鼠肺组织MHC II类分子表达,实时定量PCR技术测定肺组织总CIITA及I型、III型、IV型CIITAmRNA和TGF-β1mRNA表达;(3)ELISA法检测大鼠肺泡灌洗液中IFN-γ及IL-4水平变化;(4)收集肺活检的特发性肺纤维化(IPF)患者肺组织石蜡标本10例,免疫组化染色观察肺组织HLA-DR的表达情况。结果:(1)气管内给予博莱霉素后第7天及第28天,大鼠肺组织MHC II阳性细胞明显增多(P0.05, P0.01),第28天较第7天增多(P0.05);(2)第7天时,纤维化组大鼠肺组织总CIITA较对照组升高170.4%(P0.05),I型CIITA较对照组升高258.8%(P0.05),IV型CIITA较对照组降低87.2%(P0.01);第28天时,纤维化组大鼠肺组织总CIITA较对照组升高98.6%(P0.05),I型CIITA较对照组升高137.1%(P0.05),IV型CIITA仍较对照组低,但差异无统计学意义;纤维化组肺组织IV型CIITA在第28天时较第7天时升高667.3%(P0.01);(3)纤维化组肺组织第7天TGF-β1mRNA水平升高,达对照组的8倍多(P0.01),第28天TGF-β1mRNA较第7天略有下降,但仍显著高于对照组(P0.01),约为对照组的4倍;(4)纤维化组大鼠第7天及第28天BALF中IFN-γ含量均较对照组下降(均P0.01),而同时期BALF中IL-4含量均较对照组升高(均P0.01);(5)IPF肺组织细支气管肺泡上皮HLA-DR表达上调,与对照组比较差异具有统计学意义(Z=-3.002, P=0.001)。结论:肺组织MHCII/CIITA体系参与了博莱霉素诱导的肺纤维化的病理生理过程,这可能是通过调节肺组织局部的Th1/Th2平衡实现的;纤维化肺组织上皮细胞异常表达MHC II类抗原,推测这可能使这些上皮组织更易遭受MHC II类分子介导的免疫损伤,导致上皮损伤及异常修复的持续存在,最终导致肺纤维化形成并持续进展。
【图文】：

大鼠,肺泡,肺泡壁,纤维化

(二) 病理改变：1. 对照组：光镜下HE 染色见支气管粘膜完整、无脱落，肺泡腔内无分泌物，肺泡壁结构完整，无炎性细胞浸润（图1①）；Masson染色肺组织肺泡壁未见纤维化（图1②）。2. 纤维化组：光镜下第 7 天 HE 染色见支气管壁明显炎症浸润，不同大小支气管均有炎症，粘膜脱落，肌层明显增厚，支气管周围肺组织炎症明显，肺泡结构破坏，肺泡间隔显著增厚，肺泡腔内可见出血，明显炎性细胞浸润，并见纤维蛋白渗出，肺实变，未见明显的纤维化（图 1③），Masson 染色肺泡壁未见蓝色（图 1④）；第 28 天肺组织弥漫性炎症已明显减轻（图1⑤），仅见少量炎症细胞浸润，，但肺泡结构进一步破坏、结构紊乱，纤维组织成条索样、斑片状分布，可见纤维结节形成（图 1⑥）。(三) 形态学半定量评分：肺组织切片 HE 染色显示大鼠肺组织从注入 BLM 后第 7 天出现明显炎症

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图8 TGF-β1 荧光扩增图及标准曲线Figure 8 Real time PCR amplification kinetics curve and standard curve of TGF-β1表 6 大鼠肺内灌注博来霉素 TGF-β1 mRNA 表达变化趋势(x ±S)Table 6 Real time PCR results of the mRNA expression of TGF-β1 (x ±S)Groups 7thday 28thdayC(n=4) 0.73±0.39 1.25±0.49F(n=6) 6.46±1.83* 5.29±1.91**P <0.01 vs control group图9 大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达的实时定量PCR结果（x ±S）**9cintcontrol fibrosis
【学位授予单位】：北京大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R563.9

【参考文献】