TβRⅡ DNA甲基化在硫酸铍致肺纤维化中的作用研究

发布时间：2020-04-30 13:26

【摘要】：目的观察硫酸铍(BeSO_4)刺激下人肺腺癌A549细胞纤维化相关因子胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、α-SMA mRNA及蛋白的变化,转化生长因子-βⅡ型受体(TβRⅡ)mRNA和蛋白的变化及其DNA甲基化改变情况,探讨在BeSO_4致肺纤维化过程中TβRⅡDNA甲基化的作用。通过对A549细胞进行5-氮杂胞苷(AZC)处理进一步验证TβRⅡDNA甲基化变化,通过对A549细胞进行曲古抑菌素A(TSA)处理探讨是否发生组蛋白乙酰化。探讨在这两种甲基化转移酶抑制剂的作用下,A549细胞中纤维相关因子和TβRⅡ的表达情况。方法实验模型为离体A549细胞,分别以不同剂量BeSO_4处理细胞(溶剂为完全培养基,终浓度为1.0、10.0和100.0μmol/L,设为低、中、高剂量组),另设AZC和TSA干预组(溶剂为完全培养基,中剂量组硫酸铍+10.0μmol/L AZC,中剂量组硫酸铍+0.5μmol/L TSA)。于处理24、48和72 h后收集细胞。采用荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR)检测胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(COL-Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TβRⅡ的mRNA相对表达水平;利用蛋白印迹法(Western blot)检测COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA和TβRⅡ蛋白相对表达水平;采用巢式降落式甲基化特异性PCR法检测TβRⅡDNA甲基化水平。结果1.不同剂量BeSO_4处理A549细胞后细胞中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和α-SMA的mRNA和蛋白相对表达水平均随染毒剂量增加而升高的趋势(P0.05);低、中、高剂量组COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和α-SMA的mRNA和蛋白相对表达水平均随染毒时间的增加而增加的趋势(P0.05);通过对A549细胞进行AZC和TSA干预,在24、48、72 h三个时间点检测,与中剂量组相比,两组的COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和α-SMA蛋白相对表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);2.在24、48、72 h时间点上,低、中、高剂量组A549细胞TβRⅡ的mRNA和蛋白的相对表达水平均高于对照组(P0.05);通过对A549细胞进行AZC和TSA干预,在24、48、72 h三个时间点检测,发现在48、72 h时间点上,与中剂量组相比,两组的TβRⅡ蛋白相对表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05)。3.与对照组相比,随着染毒剂量的增加,三个剂量组中TβRⅡDNA甲基化水平均升高(P0.05);48和72 h中、高剂量组、72 h低剂量组TβRⅡDNA甲基化水平均升高(P0.05);在AZC和TSA作为BeSO_4的干预因素作用下,三个时间点上,BeSO_4+AZC组、BeSO_4+TSA组TβRⅡDNA甲基化水平均低于中剂量组(P0.05)。结论在BeSO_4处理下,A549细胞发生纤维化并且细胞中TβRⅡDNA甲基化程度升高,可能是BeSO_4致A549细胞纤维化发生、发展过程中重要的表观遗传学机制。
【图文】：

图 1 不同时间不同剂量 BeSO4处理 A549 细胞中 COL-Ⅰ的 mRNA 相对注：*表示与同时相对照组相比，，（*P<0.05）2 不同时间不同剂量 BeSO4处理 A549 细胞中 COL-Ⅰ的蛋白相对表达量

BeSO4处理A549细胞中COL-Ⅰ的WB条带图
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R563

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本文编号：2645812