miR-146a在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中的动态表达及与TNF-a的相关性分析

发布时间：2020-05-12 14:14

【摘要】：目的： 观察miR-146a和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在脂多糖(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞中的动态表达,分析两者在时间上的变化关系,探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及其机制。 方法： 将体外培养的NR8383肺泡巨噬细胞按1×106个/mL接种于六孔板,贴壁90min后加入1μg/mL的LPS,刺激0h、3h、6h、12h后离心收集培养上清液和细胞团块。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测细胞中miR-146a和TNF-αmRNA的表达情况,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养上清液中TNF-α蛋白水平的表达。miR-146a和TNF-αmRNA的相关性采用双变量Pearson相关性分析。 结果： 1.LPS刺激6h后,细胞中的miR-146a表达水平开始增高(5.33±0.81倍,P0.01),并且持续增高(12h：8.21±1.19倍,P0.01)； 2.LPS刺激3h后,细胞中TNF-a mRNA的表达即达到顶峰(67.48±24.52倍,P0.01),6h后开始降低(29.53±4.26倍,P0.05)； 3.培养上清液中的TNF-α蛋白在LPS刺激3h后即升高(359.80±57.54pg/mL,P0.01),于12h达高峰(729.22±50.40pg/mL,P0.01)； 4.细胞中miR-146a的表达水平与TNF-αmRNA的含量呈负相关(r=-0.895,P0.01)。 结论： LPS刺激0-12h后,miR-146a和TNF-α的表达呈现一定的动态变化,且细胞中miR-146a的表达水平与TNF-αmRNA的含量呈负相关,推测miR-146a可能参与了肺泡巨噬细胞的炎症反应调控。
【图文】：

被淬灭基团淬灭。在PCR扩增时，Taq酶的，3’外切酶活性将探针酶解，使荧光报告基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。具体见图2.2.印绷S助dp附“。n而舟协向阳玺d。竺竺一一朴口一「，卜、、/3‘—阮m滋rd5瓢—一补一也~一~一5，衍l、rh书13)石邝 1oDNA演犷搜冈:二二二二二二二~匀5·秒、，挤冬一八入图 2.2基于茎环结构反转录引物和 TaqManMGB探针法检测miRNA ABITaqMan⑨ MieroRNAAssaysProtoeol本实验采用ABI公司全套的TaqMan⑧ MicroRNAAssays，其含有特异miRNA逆转录茎环引物、MGB探针和PCR引物。选取 U6SnRNA作为内参。

6组图3.1LPS刺激0、3、12组6和12h的细胞形态学改变(倒置显微镜，IOOx)2总RNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳图上可以观察到二条条带，从上到下分别为28SRNA、
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R563.8

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本文编号：2660344