雷公藤多甙对犬肺移植免疫排斥反应影响的实验研究

发布时间：2020-05-15 14:39

【摘要】：肺移植作为器官移植的一个重要组成部分，被看作是治疗终末期肺部疾病的有效方法之一。长期以来，急性和慢性排斥反应一直成为困扰肺移植的一道难题，抗免疫排斥药物的选择及应用至关重要。 产于我国南方的中草药雷公藤及其衍生物具有抗免疫排斥中的作用，其应用愈来愈受到人们重视。现有的研究证实雷公藤多甙在移植免疫中通过抑制T细胞的活性以及下调IL-2的表达来发挥其免疫抑制作用。雷公藤多甙在肺移植中对移植免疫排斥反应的影响未见报道。 本研究拟通过建立犬肺移植动物模型，并给予雷公藤多甙作为抗免疫排斥治疗，观察雷公藤多甙对犬同期单肺移植免疫排斥反应的影响。 实验一 雷公藤多甙对犬单侧移植肺病理改变影响的 实验研究 目的：模拟临床肺移植的步骤及过程，建立肺移植的动物模型，观察移植后移植物的病理改变，以及雷公藤多甙对其产生的影响。方法：①实验动物分组，将西安地区成年健康杂种犬40只随机分为4组，A组为同种异体肺移植组；B组为同种异体肺移植，使用环孢素A抗免疫排斥治疗；C组为同种异体肺移植，使用雷公藤多甙抗免疫排斥治疗D组为同种异体肺移植，使用环孢素A联合雷公藤多甙抗免疫排斥治疗；②将实验犬模拟进行同期肺移植手术；③分别给予不同抗免疫排斥药物治疗，观察移植后免疫排斥反应的表现，观察移植物的存活时间以及病理组织学改变。结果：A组(对照组)存活时间最短，B组(CsA组)、C(T_(Ⅱ)组)较对照组存活时间有所延 第四军医大学硕士学位论文 长，平均时间为5一10天，，D组(CSA+T】，组)存活时间最长;A 组(对照组)排斥反应最严重，移植肺的病理改变为:光镜下可 见肺泡腔内大量的炎细胞浸润，部分出血、肿胀、坏死;实验B 组移植肺的表面有轻度淤血，未见出血、脓肿、坏死，将其剖开 后发现有部分灶性坏死，小血管周围可见大量的单核细胞及淋巴 细胞浸润，部分小血管内有凝血块形成;实验C组同实验B组大 体上观察无明显区别;实验D组移植物外观呈现淡淡的灰红色， 同对侧健肺基本相似，电镜下可见部分肺泡上皮细胞变性坏死， 肺泡腔内可见单核淋巴细胞及少量巨噬细胞，存活时间长的移植 肺肺泡腔内有胶原蛋白形成，排斥反应程度最轻，肺组织结构基 本正常。结论:雷公藤多贰联合小剂量的环抱素治疗可以明显延 长移植物的存活时间;同时可以在一定程度上抑制移植免疫排斥 反应。 实验二雷公藤多贰对犬肺移植模型外周血血清中TNFesa、IL一、IL--6 表达影响的实验研究 目的:我们在实验一成功建立犬的动物试验模型基础上，检 测移植物移植后不同时间外周血血清中TNF一、IL一2、IL一6表达 水平，观察不同抗免疫排斥药物对其表达的影响。为临床肺移植 后排斥反应的监测及治疗提供实验依据。方法:分别于手术前 ld、术后第3、5、7、10d抽取动物的外周血，即刻以5400rpm 离心15min后，收集分离血清，将标本对应编号后，置于一70℃ 冰箱保存;TNF一、IL一2、IL一6表达水平的检测使用我校免疫教 研室提供的检测试剂盒，采用双抗体夹心EL工SA方法测定TNF一 IL一2、IL一6表达值。结果:①移植后各组TNF~a表达均较 移植前升高(P0.05)，但是各实验组和对照组之间比较无统计学 意义(P.05)。②移植后各组工L一2、IL一6表达均较移植前升高， 第3页共65页 第四军医大学硕士学位论文 对照组明显升高，实验A、B组升高幅度较对照组为小(P0.05)， 实验C组IL一6表达的变化最小(P.01)。结论:T:，可能通过抑 制IL一2、IL一6表达减低了T细胞的活性起到抗免疫排斥的作用。 实验三雷公麟多贰对移植肺组织中CD44分子表达影响的实脸研究 目的:了解雷公藤多贰对移植肺抗免疫排斥的作用途径，观察其 对移植肺组织中CD44分子表达的影响。方法:各组实验动物分别 在移植后第3、5、7天采集取新鲜移植肺组织标本;采用移植肺 石蜡切片免疫组化染色一SABC法，光镜下从染色强度和阳性细胞 的细胞比例两方面评价染色结果。结果:CD44分子免疫阳性的细 胞膜呈棕黄色或深棕色，胞浆无着色。CD44表达阳性的标本例数 为21/40(53%)。在对照组(A组)有8八O例(80%)表达阳性;B 组有5/10例(50%)表达阳性;C组有4/10例(40%)表达阳性;D组 有3/10例(30%)表达阳性，明显的低于对照组，差异非常显著 (P0.01)。结论:cD44分子位于细胞膜上，着色后呈现为棕黄 色;T:r联合小剂量CSA可以抑制移植肺组织中CD44分子表达。 小结 1、采用T:，联合CsA作为抗免疫排斥药物在犬肺移植实验中移植 肺存活时间最长，术后并发症较少。 2、TNF一。、IL一2、IL一6表达同排斥反应的程度密切相关:TNF一 IL一2、IL一6可以作为监测移植物早期急性排斥反应的血清标 志物;T:，可能通过抑制IL一2、IL一6的表达起到抗免疫排斥的作 用。 3、T:r联合小剂量CsA可以抑制移植肺组织中CD44分子表达，达 到抗免疫排斥的目的。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R655.3

【参考文献】

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本文编号：2665193