TNF-α对大鼠肺微血管内皮细胞Src抑制的蛋白激酶C底物表达的影响

发布时间：2020-05-25 07:27

【摘要】： 目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对培养的大鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cell,PMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSeCKS)表达的影响及甲基强的松龙(甲强龙)对TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性损伤和SSeCKS表达的干预作用。 方法:根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的大鼠PMVEC随机分为TNF-α时间刺激组与浓度刺激组,前组以5000 U/ml的TNF-α分别与PMVEC作用0.5h,1.5h,3h,6h,12h;后组分别以200U/ml,1000U/ml,5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用3h。药物干预:分别以5000U/ml的TNF-α和0.2mg/ml的甲强龙+5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用1.5h。以上均设立正常对照组,运用RT-PCR法及Western-blot法检测SSeCKS mRNA及蛋白的表达变化。用针头式滤器检测TNF-α(5000 U/ml)组及甲强龙(0.2mg/ml)+TNF-α(5000 U/ml)组作用1.5h后大鼠PMVEC单层通透系数(Kf),以正常PMVEC单层通透性作对照。 结果:1.体外成功分离培养出大鼠PMVEC,并经形态学及FITC-PHA结合实验证实。2.通过对正常对照组大鼠PMVEC的RT-PCR法及Western-blot法检测,均发现SSeCKS特异性条带。3.正常情况下大鼠PMVEC低表达SSeCKS。5000U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKS mRNA及蛋白的表达自0.5h开始增高,3h达到高峰,随后渐行性下降但维持较高表达水平至12h,以上各时间点mRNA及蛋白的表达均明显高于正常对照组。表明TNF-α可以时间依赖的方式上调SSeCKS的mRNA及蛋白的表达。4.200 U/ml,1000 U/ml,5000 U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKS mRNA及蛋白的表达依次递增,均明显高于正常对照组。表明TNF-α可以浓度依赖的方式上调SSeCKS的mRNA及蛋白的表达。5.甲强龙+TNF-α组SSeCKS的蛋白表达明显低于TNF-α组,而甲强龙+TNF-α组PMVEC单层通透系数(Kf)也明显低于TNF-α组。表明甲强龙抑制TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性增加的同时,降低SSeCKS蛋白高表达水平。 结论:1.体外成功培养鉴定大鼠PMVEC。2.从mRNA及蛋白水平证实大鼠PMVEC表达SSeCKS。3.TNF-α以时间及浓度依赖的方式上调大鼠PMVEC中SSeCKS的mRNA及蛋白表达。4.甲强龙在抑制TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性增加的同时,降低SSeCKS蛋白高表达水平。提示SSeCKS参与TNF-α诱导大鼠PMVEC单层通透性损伤,可能具有调控PMVEC单层通透性的作用。
【图文】：

图2单层汇合的原代大鼠PMVEC(xl00倒置显微镜)PrimaryeulturedratPMVECmonolayerunderPhase一on甘ast而erosP柳〔C的鉴定的细胞与FITC一PHA结合呈黄绿色荧光，见图3，符合血

Fig2PrimaryeulturedratPMVECmonolayerunderPhase一on甘ast而 eroseoPex100 3.1.2大鼠P柳〔C的鉴定所培养的细胞与FITC一PHA结合呈黄绿色荧光，，见图3，符合血管内皮细胞特性。图3大鼠PMVEC植物凝血素结合特性观察(xZoo荧光显微镜) Fig3RatPMVECboundtoFll℃一 PllAunderfluoreseeneemicroseoPeX200
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R563.8

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本文编号：2679794