microRNAs在烟雾吸入性肺损伤大鼠体内差异表达的研究

发布时间：2020-05-26 18:08

【摘要】：目的基于课题组前期的工作,建立先进的烟雾吸入性肺损伤(Smoke inhalation injury,SII)大鼠模型,探讨大鼠致伤后28天体内病理生理及炎症因子变化,检测致伤1天与正常大鼠肺泡灌洗液中microRNAs(miRNAs)差异表达,评估SII大鼠体内潜在作用的microRNAs和相应靶基因调节。方法将42只雄性Wistar大鼠随机分为7组:正常对照组(n=6),烟雾吸入性肺损伤组6组(n=36)。建立烟雾吸入伤模型,分别于致伤后1,2,3,7,14,28天(n=6)取材,肺组织HE、Masson染色观察烟熏造模后相应时间点病理学改变,检测肺组织湿干比重评价肺水肿程度,ELISA检测血浆及支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)的含量,运用基因Affymetrix miRNAs 4.0芯片技术初步筛选出烟雾伤后差异性表达的miRNAs,q RT-PCR验证结果,初步预测潜在作用的miRNAs以及相应靶基因。结果肺组织病理学显示,致伤前3天为发病急性期,以大气道周围病变为主,气道上皮细胞纤毛结构破坏,气道内局部分泌物增加同时伴有局部肺泡间质增厚、破裂融合;致伤7天后主要表现为局部肺间质病变,肺泡融合,偶见炎性细胞侵润灶;致伤28天大部分出现大片状间质病变,局部肺部纤维化表现,胶原纤维沉积。损伤1天和2天组大鼠肺湿干比重高于正常对照组(P㩳0.05),损伤7天、14天和28天组明显低于损伤1天组(P㩳0.05)。与正常对照组相比,血浆IL-6在损伤1天后明显升高,其后降低,14天后出现第二个高峰(P0.05),肺泡灌洗液中IL-6损伤后未出现明显改变,于损伤28天后出现轻度降低(P0.05);损伤1天后血浆中TNF-α含量出现明显升高,而损伤28天组大鼠血浆TNF-α含量明显低于正常对照组(P0.05),肺泡灌洗液中TNF-α的含量损伤后明显升高,于损伤后2天和14天出现两个高峰(P0.05);血浆IL-10含量在损伤后的第二天显著增加,随后降低,于损伤后第七天开始持续增加直至28天(P0.05),肺泡灌洗液IL-10与TNF-α的变化类似,在损伤后2天和14天出现两个高峰(P0.05)。与正常对照组比较,SII模型组大鼠肺泡灌洗液表达上调(Fold Change≥2.0)的miRNAs有23个;而表达下调的miRNAs只有2个。选取前12个差异表达的miRNAs中9个人鼠碱基序列相同的miRNAs,提取正常及损伤1天大鼠肺泡灌洗液中miRNAs,qRT-PCR验证发现,肺泡灌洗液中miR-34c-5p,miR-92b-3p,miR-205,miR-34b-3p,miR-92a-3p,let-7b-5p,let-7c-5p与芯片结论一致(P0.05)。通过靶基因软件预测及体外初步研究,发现rno-miR-34c-5p表达的增加可促进了靶基因ntn-1的表达降低(P0.05)。结论本课题组研究了SII大鼠的病理生理改变和炎症因子的动态变化,miRNAs芯片筛选SII大鼠BALF中miRNAs的差异表达变化,提示这些差异miRNAs可能作为SII的损伤诊断标志物及潜在的药物治疗靶点。
【图文】：

烟雾,发生装置,控制面板,发烟器

2、0.01M PBS 磷酸盐缓冲液（pH 7.2~7.4）1 袋 PBS 磷酸缓冲液干粉溶于去离子水中，最后体积为 2L，配置成 0.01M磷酸盐缓冲液。二、实验方法(一)烟雾发烟器简介烟雾发烟器由武警后勤学院附属医院救援医学研究所课题组基于此前烟雾发生器研发，明杰自动化有限公司制作。该仪器可实时调控烟雾发生器内温度、烟雾浓度、CO 浓度、O2浓度等参数，确保动物造模的稳定（图 1）。

烟雾,暴露时间,生存曲线,生存率

2、造模实验时间探索为建立 SII 大鼠模型，利用自行研发的烟雾发生器进行动物造模。为优化的实验条件，借鉴国内建造的大鼠模型[8]，将大鼠分别暴露于烟雾 12、15、1min，最终得出存活率分别为 100%、100%、75%、50%。结合肺组织 H 12 分钟烟雾吸入组没有观察到明显差异，暴露烟雾 15 分钟导致肺严重的化，包括大气道病变，增厚的肺泡和支气管壁以及气道周围的炎性细胞浸于此，我们使用 15 分钟烟雾暴露进行以下实验研究。烟熏完后老鼠明显活，闻及老鼠喘息，眼眶鼻周变红，轻微渗血，于 10 分钟后症状稍缓解。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R563

【参考文献】