槐杞黄联合孟鲁司特钠干预对哮喘大鼠气道炎症及LTD4、IL-17表达的影响

发布时间：2020-05-27 21:27

【摘要】：目的 观察槐杞黄颗粒和孟鲁特钠(montelukast, MK)十预哮喘模型大鼠对气道炎症、气道重塑以及白三烯D4(leukotriene D4, LTD4)和白介素17A(Interleukin-17A,简称IL-17)表达的影响；探讨槐杞黄辅助孟鲁司特钠治疗哮喘的作用机制。 方法 1.取4-6周龄雄性SD大鼠(体重120±10g)40只,随机分为5组：对照组(Control)、模型组(Model)、孟鲁司特钠组(MK)、槐杞黄组(H)、.孟鲁司特钠+槐杞黄组(MK+H),每组8只。 2.除对照组外,其他各组分别于第1天、第8天腹腔注射0.1%卵清蛋白(ovalbumin, OVA)混合液1 m1(含OVA1mg、氢氧化铝100mg及灭活百日咳杆菌苗5×109个作为免疫佐剂)致敏,第15天开始以1%OVA雾化液8m1隔日1次雾化激发,20分钟／次,连续激发4周建立哮喘模型。对照组致敏激发均以生理盐水代替。从第15天开始各干预组每天分别予以孟鲁司特钠(1mg/100g/d)、槐杞黄(0.4g/100g/d)、孟鲁司特钠(1mg/100g/d)+槐杞黄(0.4g/100g/d)灌胃处理。 3.各组大鼠于末次激发后24小时处死,取血浆、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluids. BALF)及右肺上叶组织。右肺上叶组织制作石蜡切片,行HE染色、Masson染色和AB-PAS染色行病理学检查,分析气道炎症和气道重塑情况；免疫组化方法测定肺组织IL-17表达；计数BALF细胞总数和细胞分类；ELISA方法测定血浆及BALF上清液中LTD4和IL-17的浓度 结果 1.临床表现：与对照组相比,在激发过程中,模型组大鼠逐渐出现烦燥不安、挠鼻、呼吸急促、呈点状呼吸、发绀、活动进食减少或俯卧不动、出现竖毛、毛发失去光泽甚至脱毛、反应不敏捷等哮喘样表现。其它干预组大鼠症状较模型组不同程度减轻,以孟鲁司特钠组及孟鲁司特钠+槐杞黄组改善明显。 2.气道病理学改变： 1)支气管周围炎性细胞浸润程度：模型组支气管周围炎性细胞浸润程度较对照组明显加重(P0.05),与模型组比较,各干预组支气管周围炎性细胞浸润程度按H组、MK组、MK+H组顺序依次减轻(P0.05)。 2)杯状细胞占上皮细胞百分比：模型组杯状细胞占上皮细胞百分比较对照组明显升高(P0.05)；各干预组均较模型组明显降低(P0.05)；MK组、MK+H组之间比较无显著性差异,均较H组明显降低(P0.05)。 3)胶原沉积面积：模型组胶原沉积面积较对照组明显增加(P0.05)；MK组、MK+H组之间比较无显著性差异,均较模型组明显降低(P0.05)；H组与模型组比较无显著性差异。 4)平滑肌增生面积：模型组平滑肌增生面积较对照组明显增加(P0.05)；各干预组较模型组明显减少(P0.05)：MK+H组减轻最明显(P0.05)；MK组与(?)组比较无统计学差异。 5)免疫组化：模型组IL-17蛋白表达量较对照组明显升高(P0.05);各干预组IL-17蛋白表达量按H组、MK组、MK+H组顺序较模型组依次下降(P0.05)。 3.BALF细胞总数和细胞分类计数：与对照组比较,模型组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞(eosinophils, EOS)及中性粒细胞(neutrophils,NEU)占细胞总数百分比均明显升高(P0.05)；与模型组比较,各干预组BALF中细胞总数、EOS及NEU占细胞总数百分比按H组、MK组、MK+H组顺序依次下降,但H组中性粒细胞占细胞总数百分比与模型组比较差异无统计学意义;与MK组比较,MK+H组EOS及NEU占细胞总数百分比下降无统计学意义。 4.血浆和BALF LTD4、IL-17浓度： 1)血浆和BALF中LTD4浓度：模型组血浆和BALF中LTD4浓度均高于正常对照组(P0.05)；与模型组比较,各干预组血浆和BALF中LTD4浓度按H组、MK组、MK+H组顺序依次下降,但MK+H组与MK组之间比较无显著差异,H组血浆LTD4浓度与模型组比较差异无统计学意义。 2)血浆和BALF中IL-17浓度：模型组血浆和BALF中IL-17浓度均高于正常对照组(P0.05)；与模型组比较,各干预组血浆和BALF中IL-17浓度按H组、MK组、MK+H组顺序依次下降,但H组与模型组比较下降无统计学意义。 5.血浆与BALF中IL-17浓度及肺组织IL-17表达量呈正相关(P0.05)；肺组织IL-17表达量与BALF中EOS占细胞总数百分比及NEU占细胞总数百分比呈正相关(P0.05)。 结论 1.哮喘大鼠血浆及BALF中LTD4浓度明显增高。 2.哮喘大鼠血浆及BALF中IL-17浓度明显增高,在小支气管柱状上皮及炎症细胞上IL-17蛋白表达量明显增高。 3.血浆IL-17浓度与BALF中IL-17浓度及肺组织IL-17蛋白表达量呈良好的相关性与一致性,提示血液检测IL-17可以简便准确地反映气道IL-17水平。 4.孟鲁司特钠能降低哮喘大鼠血浆及BALF中LTD4、IL-17浓度,下调肺组织IL-17蛋白的表达量,抑制气道炎症,减缓气道重塑；与槐杞黄颗粒联合干预后能进一步改善上述指标,其抗炎作用可能是通过下调LTD4、IL-17来实现。
【图文】：

H组与模型组比较无显著性差异:各干预组平滑肌增生面积较模型组明显降低(尸<0.05)，MK组与H组比较无显著性差异，M胶+H组较MK组及H组明显降低(尸<0.05)(见表2、图2、附图2一1至2一5、附图3一1至3一5)。表2各组气道重塑的比较(X士s)(气道数=20)例数气道杯状细胞占上皮细胶原沉积面积组别(只)胞百分比(%)例a评bm-.卿2/四) 82.13士1.02 537.75士l，6#一一____*弃匕25.6勺士j.(，4 8343妊1.35▲*# 8261叭171+*#4，93士0.5322.5脚.00#15.13士1.27*春 21.05士l，60▲#16.42均.76+*#平滑肌增生面积(war可pbm，四今卿)17刀9士 C.673544土144#32.07土 1.51*#33.05土l，15*#30.25士l，33+▲*#劝el

H组、MK+H组IL一17表达较模型组减少，有显著意义(P<0.05)，MK组表达低于H组(尸<住05)，MX十H组较MK组及H组表达减少(尸<0.05)(见表3、图3、附图4一l至4一5)。表3肺组织压17表达童免疾组化浏定(X士s，阳性面积百分比表示)组别例数(只)IL一17表达量 Control87.21土1.19M诚 1522.摊1.81#袱 513叫土1.51*# H519.93士100▲*#瓜 +H511.6肚1.55+▲*#一注:一#与6h任61组比较户<百.0反*与两6d己1组比较户夏在6瓦石与丽K姐正已较币而…厉厂.一+与H组比较P<0刀5泪耀崛卜11曰工 ControlModelMK+H图3肺组织IL一17表达量免疫组化测定(X士s，，阳性面积表示)注:器与Control组比较P<005，*与Model组比较P<o乃5，么与MK组比较P<0.05，+与H组比较P<0D5
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R562.25

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本文编号：2684163