骨髓干细胞移植对急性肺损伤生物学作用的基础研究

发布时间：2020-05-31 23:26

【摘要】：目的:研究骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性肺损伤模型的生物学影响和在损伤修复中的作用及可能的机制,探讨急性肺损伤细胞治疗的可能性。 方法:首先以密度梯度离心法分离、体外培养并扩增成体大鼠骨髓MSCs,采用免疫细胞化学及流式细胞术检测MSCs抗原表达,同时检测MSCs向骨细胞及脂肪细胞的分化能力,并用BrdU或DAPI标记MSCs;采用细菌内毒素攻击法建立大鼠急性肺损伤模型,进行干细胞移植治疗。将72只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:(1)正常对照组(C,n=24),经尾静脉注入0.5ml生理盐水;(2)单纯肺损伤组(L,n=24):经尾静脉注射LPS(5mg/kg),然后立即经另一条尾静脉注入0.5ml生理盐水;(3)急性肺损伤干细胞移植组(LM,n=24):经尾静脉注入LPS(5mg/kg),然后立即经另一条尾静脉注入培养并标记的大鼠MSCs(1.0×10~6溶于0.5ml生理盐水)。各组在实验后2h、4h、6h麻醉状态下活杀动物,每个时间点各8只。经腹主动脉取血、离心,分离血浆,采用酶联免疫吸附法测定血浆中TNF-a、IL-6的含量;收集肺组织测定湿/干重比值、比色法测肺匀浆髓过氧化酶(MPO)活性、制作组织切片以HE和免疫组化法行病理学检查。 结果:1.骨髓MSCs的分离、培养及抗原表达与多向分化能力:密度梯度离心法能成功分离纯化大鼠骨髓MSCs。免疫细胞化学示大鼠MSCs表达CD29和CD44,不表达造血干细胞标志CD34;BrdU标记法阳性率约为74%,DAPI标记法阳性率可达90%以上;流式细胞仪结果显示,随传代次数的增多,MSCs增殖能力减弱;BrdU标记和未标记细胞增殖周期无明显差异。体外诱导实验显示,MSCs可向脂肪细胞、成骨细胞等多向分化。2.LPS致伤作用及MSCs移植对ALI的影响:组织切片HE染色显示,LM组肺组织炎症改变较L组减轻。免疫组织化学染色显示MSCs移植后在肺内归巢,并有细胞形态的变化,但未检测到细胞分子表型的改变。与C组相比,LM组、L组在致伤后肺W/D值、组织MPO活性、血浆TNF-a及IL-6水平均升高(P0.01),但LM
【图文】：

图2大鼠MSCS的免疫细胞化学染色:A.传代培养的大鼠MSCS(倒置相差显微镜，，X200);B.大鼠MSCS的CD29染色(光学显微镜DAB显色X200);C.大鼠MSCS的CD44染色(光学显微镜DAB显色X200);D.大鼠MSCS的CD34染色(光学显微镜DAB显色X100)。

黄色;CD34在MSCs不表达(图ZD)。流式细胞仪示大鼠MSCsCD29阳性率约为70%，CD44约为90%，CD34的阳性率则低于0.1%;阴性对照阳性率为0.07%(图3)。
【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R563.8

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本文编号：2690621