小发卡结构状RNA联合脱氧核酶抗呼吸道合胞病毒实验研究

发布时间：2020-06-09 08:47

【摘要】： 呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus. RSV)是造成世界范围内婴幼儿及成人呼吸道感染的首位病毒病原,迄今为止尚没有针对RSV感染的可靠疫苗和治疗药物问世,RNA干扰(RNA interference ,RNAi)和脱氧核酶(Doxyribozyme,DNAzyme,DZ)技术是能够有效抑制目的基因表达的两种基因治疗策略,已被广泛用于基因功能、肿瘤及病毒感染的研究。随着分子生物学和分子病毒学的发展,尤其是对病毒基因结构和功能的研究取得长足进步,基因水平特别是基因转录后水平阻断病毒复制成为当前研究热点。M2基因在RSV的转录和复制中起着重要作用,为了从基因水平阻断RSV感染,本研究针对RSV M2基因mRNA设计、构建表达小发卡结构状RNA(short hairpin RNA, shRNA)的重组质粒(pshRNA),并在细胞培养系统观察小发卡结构状RNA抗RSV活性以及联合脱氧核酶治疗对RSV复制的抑制效应,为利用基因治疗防治RSV感染的研究奠定基础。 第一部分小发卡结构状RNA作用靶点的选择及载体质粒的构建与鉴定 目的:选择在RSV转录复制中起重要作用的M2基因作为shRNA干扰的靶点,根据siRNA的设计原则,设计和构建针对RSVM2基因
【图文】：

b价格昂贵也使其应用受到限制[16]。述，目前用于防治 RSV 感染的手段非常有限，探索新的途径控制解决的现实问题。随着分子生物学和分子病毒学的发展，尤其和功能的研究取得长足进步，基因水平特别是基因转录后水平当前的研究热点。阻断技术主要在阻断靶基因 DNA 和 RNA 两个水平上，前者主ene knockout）及 DNA 诱骗（DNA decoy）技术，后者主要包括酶、脱氧核酶和最近几年新发现的 RNA 干扰技术等反义基因治反义基因治疗技术是根据核酸杂交原理设计，采用反义核酸分子靶基因的生物学新技术。反义基因治疗可以 DNA 为靶分子，反形成三链 DNA，在基因转录或复制水平上调节病毒基因表达，靶分子，反义核酸结合到 mRNA 分子的特定部位，在剪接、转运或调节病毒基因表达[18]。靶向病毒 mRNA 的反义技术是当今控制

NS1-NS2-N-P-M-SH-G-F-M2（M2-1/M2-2）-L-5，（图1-1），共编码11个病毒蛋白[1-3]（图1-2），分别为：核衣壳蛋白N、磷蛋白P、多聚酶亚单位L、转录延长因子M2-1、黏附蛋白G、融合蛋白F、小疏水蛋白SH、非结构蛋白NS1和NS2、基质蛋白M和M2-2。 RSV外层为包膜，，内层为衣壳，核心是RNA核酸，衣壳紧紧包绕RNA核酸，形成病毒的核衣壳。RSV基因组编码产物依功能而言主要分为两部分，一部分为与病毒感染有关的三个蛋白F、G、SH，另一部分为与病毒转录复制相关蛋白。RSV M2基因位于F和L基因之间
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R56

【参考文献】

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本文编号：2704439