Notch1通路调节Treg细胞比例变化在老年AECOPD中的作用及机制研究

发布时间：2020-06-11 11:08

【摘要】：目的:探讨老年AECOPD患者外周血中Notch1基因、HES1蛋白的表达水平和Treg细胞的比例变化,以及Notch1信号通路在COPD免疫平衡中的作用。方法:选取2015年8月至2018年3月在湖南省人民医院就诊的40例AECOPD患者为研究对象,其中成年AECOPD组(15岁-64岁)和老年AECOPD组(≥65岁)各20例,另选取40例健康体检者为对照组,其中成年对照组和老年对照组各20例。应用密度梯度离心法分选出PBMC,并采用流式细胞术检测外周血Treg细胞的比例;采用RT-PCR及Western Blot分别检测Notch1在外周血中的相对表达量及HES1蛋白在外周血中的含量。采集正常人外周血,用免疫磁珠法分选Treg细胞,加入Notch抑制剂和Treg细胞共培养,用流式细胞术测Treg细胞的比例。结果:(1)用流式细胞术检测其外周血单个核细胞中Treg细胞比例,与成年对照组[0.06(0.00-0.12)]相比,成年AECOPD组[0.38(0.16-8.49)]外周血中Treg细胞比例明显升高(P0.05);与老年对照组[0.12(0.07-1.32)]相比,老年AECOPD组[4.415(0.39-9.61)]外周血中Treg细胞比例均明显升高(P0.05);与成年对照组[0.06(0.00-0.12)]相比,老年对照组[0.12(0.07-1.32)]外周血中Treg细胞比例明显升高(P0.05);与成年AECOPD组[0.38(0.16-8.49)]相比,老年AECOPD组[4.415(0.39-9.61)]外周血中Treg细胞比例明显升高(P0.05)。(2)采用Western Blot法检测外周血中HES1的蛋白含量,成年AECOPD组外周血中HES1蛋白含量(29.49±8.96)较成年对照组(9.96±6.34)明显升高(P0.01);老年AECOPD组外周血中HES1蛋白含量(37.49±11.86)较老年对照组(20.47±7.28)明显升高(P0.01);老年对照组外周血中HES1蛋白含量(20.47±7.28)较成年对照组(9.96±6.34)明显升高(P0.01);老年AECOPD组外周血中HES1蛋白含量(37.49±11.86)较成年AECOPD组(29.49±8.96)明显升高(P0.05)。(3)采用RT-PCR检测外周血中Notch1的相对表达量,成年AECOPD组外周血单个核细胞中Notch1的相对表达量(1.73±0.48)较成年对照组(1.03±0.13)明显升高(P0.01);老年AECOPD组外周血单个核细胞中Notch1的相对表达量(2.09±0.52)较老年对照组(1.15±0.27)明显升高(P0.01);老年对照组外周血单个核细胞中Notch1的相对表达量(1.15±0.27)较成年对照组(1.03±0.13)明显升高(P0.01);老年AECOPD组外周血单个核细胞中Notch1的相对表达量(2.09±0.52)较成年AECOPD组(1.73±0.48)明显升高(P0.05)。(4)相关关系:年龄与外周血血清中HES1蛋白含量呈正性相关(Pearson相关系数r=0.419,P0.01);年龄与外周血血清中Notch1相对表达量呈正性相关(Pearson相关系数r=0.226,P0.05)。第一秒用力呼气量占预计值百分比与外周血血清中HES1蛋白呈负性相关(Pearson相关系数r=-0.710,P0.01)。第一秒用力呼气量占预计值百分比与外周血血清中Notch1呈负性相关(Pearson相关系数r=-0.657,P0.01)。外周血Treg比例与外周血血清中HES1蛋白含量呈正性相关(Pearson相关系数r=0.635,P0.01);外周血Treg比例与外周血血清中Notch1相对表达量呈正性相关(Pearson相关系数r=0.686,P0.01)。(5)用流式细胞术检测不同浓度抑制处理后的Treg细胞比例,与处理前比较,1u M浓度Notch1抑制剂处理组中的Treg细胞无明显下降(P0.05),其余加入Notch抑制剂处理组中的Treg细胞比例明显下降(P0.05);1u M与2.5u M浓度Notch1抑制剂组之间以及2.5u M与5u M浓度Notch1抑制剂组之间无统计学差异(P0.05),其他各组之间相互比较,有统计学差异(P0.05)。结论:Notch1可能通过激活Notch信号通路进而影响Treg细胞比例变化,从而在调控老年AECOPD中发挥作用;抑制Notch信号通路可能影响AECOPD的免疫平衡。
【图文】：

流式检测Treg细胞中比例

附图 1.2 外周血中 Treg 在各组中的比例注：A 为成年对照组 B 为成年 AECOPD 组 C 为老年对照组 D 为老年 AECOPD 组；aP<0.05 与成年对照组比较；bP<0.05 与成年对照组比较；cP<0.05 与老年对照组比较；dP<0.05 与成年 COPD 组比较HES1β-actin1A1 B1 C1 D1附图 2.1 WB 检测 HES1 在各组间的表达
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R563.9

【参考文献】

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本文编号：2707817