地塞米松通过促进A549细胞SUMO化上调AQP4的表达

发布时间：2020-06-12 23:33

【摘要】：目的:1.明确地塞米松对AQPs表达的影响。2.探索地塞米松对SUMOs表达的影响。3.探究SUMO化修饰与AQPs之间的调控关系。方法:1.地塞米松对A549细胞生长的影响及对AQPs表达的影响。选取A549细胞作为研究对象,代替人肺泡II型上皮细胞,加入不同浓度的地塞米松后培养不同时间,显微镜下观察细胞的图像,CCK-8实验检测A549细胞的活力,TUNNEL实验检测细胞凋亡情况。Western Blot分别检测GR、AQP1、AQP4、AQP5蛋白在A549细胞中的表达水平。2.地塞米松对SUMO1、SUMO2/3及UBC9表达的影响。不同浓度的地塞米松作用于A549细胞不同时间,通过Western Blot分别检测SUMO1、SUMO2/3及UBC9蛋白在A549细胞中的表达水平。3.地塞米松作用于A549细胞后,检测SUMOs及AQPs的时空分布;敲低A549细胞中SUMO2/3后检测AQPs的表达。地塞米松作用A549细胞不同时间后,免疫荧光染色检测SUMO1、SUMO2/3、GR、AQP1、AQP4、AQP5的时空分布。构建SUMO2/3干涉质粒,转染A549细胞,PCR检测SUMO2和SUMO3的干涉效果,Western Blot检测SUMO2/3、UBC9、AQP1、AQP4、AQP5的表达水平。结果:1.显微镜下发现,高浓度的地塞米松作用后,A549细胞的形态无明显改变,排列稀疏,数量减少,而低浓度的地塞米松作用后A549细胞变化不明显;CCK-8及TUNNEL实验结果显示,低浓度的地塞米松对A549细胞的生长没有明显的抑制作用。地塞米松作用A549细胞后,GR的表达逐渐上升在36小时达到峰值。AQP1的表达无明显变化。AQP4的表达逐渐上升,在48小时达到峰值。AQP5的表达逐渐上升,24小时达峰值,后下降至正常水平。2.Western Blot结果显示,地塞米松作用A549细胞后,结合状态的SUMO1没有明显变化,游离状态的SUMO1轻微上升,结合状态的SUOMO2/3明显增加,在10~(-7)、5x10~(-7)、10~(-8)M浓度时均具有统计学意义,游离的SUOMO2/3无明显变化。选取10~(-7)M浓度的地塞米松作为后续实验的作用浓度。再次检测SUMO1、SUMO2/3及UBC9蛋白在A549细胞中的表达水平,结果发现地塞米松对SUMO1的表达无明显影响,SUMO2/3的表达增加,对UBC9的表达无明显影响。3.免疫荧光染色结果显示,地塞米松作用A549细胞后,SUMO1、SUMO2/3发生浆核移位,AQP1、AQP4的表达增加,AQP5的表达在24小时增加在48小时下降,GR遵循与AQP5相似的规律。PCR结果证实,SUMO2/3干涉质粒转染A549细胞后,SUMO2和SUMO3的表达降低。Western Blot结果显示,敲低SUMO2/3转染A549细胞后,在SUMO2/3表达下降的同时AQP4的表达也下降。结论:低浓度的地塞米松对细胞生长无明显抑制作用,可以促进AQP4蛋白表达,同时也可以促进细胞内蛋白的SUMO化修饰,当敲低SUMO2/3时,AQP4蛋白的表达量也下降。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R563

【参考文献】