多重媒介探针熔解曲线分析技术在下呼吸道病原体诊断中的应用研究

发布时间：2020-06-19 03:23

【摘要】：下呼吸道感染是严重危害人类健康的传染性疾病之一,依照不同的临床表征,可划分为多种类型,包括社区获得性肺炎、医院获得性肺炎、呼吸机相关性肺炎等,且不同的疾病类型感染的病原谱有各自的特点,同时又存在广泛的交叉。因此,下呼吸道感染病原体的准确鉴定,对诊治和临床用药具有重要意义。本论文以多重PCR技术为基础,结合多色探针熔解曲线分析技术和媒介探针技术,建立一种快速、准确、简便、成本低的鉴定方法,以满足临床的检测需求。第一章,综述了下呼吸道感染的背景、流行病学、病原体之间的相互作用、耐药情况,随后比较了几种用于下呼吸道感染的常见检测方法,评价其各自的优缺点,在此基础上提出了本论文主要研究目标和方法。第二章,我们结合多重PCR技术、多色探针熔解曲线分析技术和媒介探针技术,设计下呼吸道多重媒介探针熔解曲线分析检测体系,用于定性检测感染下呼吸道常见的病原体,包含18种病原菌和1个耐药基因。同时设计实验考察体系的特异性、重复性、灵敏度、混合感染识别能力等,最后用临床标本进行了评价。第三章,建立的下呼吸道多重媒介探针熔解曲线分析检测体系,使用质粒作为参考品进行体系性能考察。结果显示体系特异良好,能准确区分各个检测对象,体系重复性良好(CV0.5%),体系灵敏度可达50拷贝/反应,个别对象能达5拷贝/反应,混合感染识别能力最低能识别某一种菌的混合浓度50拷贝/反应。后续对299例临床标本进行检测,结果显示,标本检测阳性率为61.87%(185/299),混合感染率21.40%。我们随机抽取160份样本进行单重对照体系的逐一检测,结果表明,每种病原体两者检测方法的一致率均大于95%,证实了本体系的可靠性和准确性。
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R56
【图文】：

第一章前言逡逑而我国儿童肺炎发病率介于两者之间。相关资料表明，促成我国儿童死亡的主要逡逑原因是肺炎，１９９１年统计的五岁以下儿童因肺炎而死亡的人数是美国的１０倍以逡逑上［７］。尽管近几年死亡人数有所下降，但是有关儿童肺炎死亡率和发病率等一些逡逑流行病学的数据依然不全面。对医学界来讲，下呼吸道感染病原体的准确鉴定依逡逑然是个急需解决的问题。逡逑

称之为媒介子，３＇端则是与靶序列特异的杂交的一段区域，用于特异识别靶序逡逑列，并且对媒介子的３＇端进行氨基的封闭修饰，阻止其延伸。通用荧光探针实逡逑质即为分子信标探针的结构，如图１－２邋Ｂ所示，它具有以下特点：（１）在我们逡逑设定的条件下，软件预测只形成一种信标结构；（２）邋５＇端标记荧光基团（ＦＭＡ、逡逑ＲＯＸ、ＨＥＸ、ＣＹ５）邋，邋３＇端根据荧光基团的不同，相应标记上ＢＨＱ１或ＢＨＱ２逡逑的泮灭基团的标记；（３）通用荧光探针与体系内任意检测对象的序列都不会产逡逑生杂交而形成熔解；（４）媒介子序列是与通用荧光探针环上的某段序列互补。逡逑Ａ、Ｍｅｄｉａｔｏｒ邋ｐｒｏｂｅ逦Ｂ％邋Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ邋ｐｒｏｂｅ逡逑逦逦通用序列（媒介子）逦ｒ＾１Ｊ１逡逑逦靶特异曑（

本文编号：2720237