β-防御素-2在大鼠肺炎中的表达及与IL-17F的关系

发布时间：2020-06-22 02:19

【摘要】：背景 防御素(defensins)是一类广泛存在于动植物体内的富含半胱氨酸的阳离子内源性抗微生物肽,它们的抗菌活性及广泛表达提示它们在多种组织中参与先天免疫反应。研究表明防御素作为T细胞和树突状细胞的化学增活素而对适应性免疫系统起信号传导作用。β-防御素-2(beta-defensin-2)是1997年在银屑病患者皮肤中发现的一种由41个氨基酸残基组成、富含半胱氨酸、具有3对二硫键的阳离子抗菌肽。它主要分布于皮肤和呼吸道上皮细胞,对多种病源微生物有高效的杀伤活力性,并且对树突状细胞和记忆型T细胞有强的趋化作用,在机体的免疫炎症反应中发挥重要作用。国外文献报道,重组β-防御素-2在体外对多种革兰阳性及阴性菌有杀伤作用,而且目前未发现耐药性。但其发挥杀伤作用依赖周围离子环境,在过高的离子浓度下杀伤作用会减退。另外,它在体外可被IL-17A、IL-17F诱导表达,但在体内二者之间有何联系目前还不得而知。肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是一种常见的医院内感染致病菌。它引起的肺炎进展快,易累及多肺叶、并且对多种抗生素耐药,严重时可发生全身炎症反应综合症(Systemic inflammatory response syndrome, SIRS)或多器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome, MODS),成为临床治疗的棘手问题。国内外学者正积极研究β-防御素-2在细菌感染中的免疫调控和杀菌作用,从而探索它在治疗耐药菌感染中的作用,改变单一使用抗生素治疗耐药菌感染的局面。 第一部分:构建SD大鼠肺炎实验模型 目的 直视下经气管滴入肺炎克雷伯菌标准株菌液建立SD大鼠肺炎实验模型,为研究β-防御素-2及IL-17F在肺炎模型中的表达及二者之间的关系创造平台。 方法 健康SPF级SD雄性大鼠50只,体重190-220g,7周龄,随机分为两组①肺炎组(n=25):气管内直接滴入肺炎克雷伯菌菌液(浓度相当于0.9×109CFU/ml)0.2ml复制肺炎模型;②对照组(n=25):同样方法滴入等量生理盐水,肺炎组与对照组又分别按不同时间点分为5个小组,每组5只,接种后分别于4、12小时、1、3、5天分批处死动物,分别取每组大鼠左上肺及右上肺进行组织匀浆菌落计数和病理学检查。根据细菌学和病理学指标对建立的肺炎模型进行评价。 结果 1.肺炎组大鼠临床症状明显重于对照组。 2.病理结果:肺炎组大鼠肺组织大体观察可见双侧多叶出现明显充血、出血、水肿,镜下可见肺泡结构破坏,肺泡腔及间质显著充血及水肿,中性粒细胞浸润明显,3天组病变最为严重。对照组大鼠肺组织大体观察可见表面光滑,色泽粉红,质软,弹性良好,各时间点无明显差异。 3.组织匀浆菌落计数:肺炎组大鼠肺组织匀浆均可培养出菌落,4小时组计数最高,此后逐渐降低,第5天时已显著降低,对照组所有大鼠均未培养出任何细菌。经本院细菌室API细菌鉴定系统验证培养出的菌落均为肺炎克雷伯菌标准株。 第二部分:β-防御素-2及IL-17F的测定 目的 测定大鼠β-防御素-2 (rat beta-defensin-2,rBD-2)及IL-17F(Interleukin-17F)在大鼠肺炎模型中的表达,观察其变化规律,探讨两者之间的相关性。 方法 分别取肺炎组及对照组大鼠右中肺提取总RNA保存于-80℃,采用FQ-PCR检测β-防御素-2相对表达量,取下腔静脉血,留血清ELISA法检测IL-17F浓度。 结果 相同时间点β-防御素-2在肺炎组的表达显著高于对照组(P0.05),其中肺炎组第3天与同组其他各时间点比较表达明显高于其他各时间点(P 0.05)。IL-17F在肺炎组中的表达显著高于对照组(P0.05),其中肺炎组第1天与同组其他各时间点比较表达明显高于其他各时间点(P 0.05)。 结论 1.直视下气管内滴入肺炎克雷伯菌液可成功复制大鼠克雷伯菌肺炎模型。 2.β-防御素-2与IL-17F在大鼠肺炎模型中显著表达,分别于造模后第3天和第1天达到高峰。 3.IL-17F与β-防御素-2呈正相关性,R=0.732 P 0.05。
【学位授予单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R563.1
【图文】：

不同时间点肺炎组大鼠组织匀浆菌落计数不同时间点菌落计数（×105CFU/g）组别4h 12h 1d 3d 5d肺炎组 0.96 0.83 0.56 0.29 0.016对照组 均未培养出菌落1.3.3 肺组织病理改变1.肉眼观察：对照组肺组织外观色泽粉红，表面光滑，未见明显异常改变。肺炎组双肺呈暗红色，弥漫性充血、水肿，肺组织内散在分布大小不等的实变灶，形状不规则，色灰红或灰黄色，可见点状和片状出血，弹性差。见图 22.光镜检查：对照组支气管粘膜上皮完整，肺小叶结构清晰，肺泡腔结构完整，肺泡壁无增厚，肺泡间质无炎性浸润。肺炎组肺泡萎陷，腔内渗出、出血，肺组织结构消失，细支气管及其周围肺泡腔内充满脓性渗出物及少量纤维素。肺泡间隔增宽、断裂，肺泡间隔内血管扩张充血，炎症细胞浸润。见图 2

不同时间点肺炎组大鼠组织匀浆菌落计数不同时间点菌落计数（×105CFU/g）组别4h 12h 1d 3d 5d肺炎组 0.96 0.83 0.56 0.29 0.016对照组 均未培养出菌落1.3.3 肺组织病理改变1.肉眼观察：对照组肺组织外观色泽粉红，表面光滑，未见明显异常改变。肺炎组双肺呈暗红色，弥漫性充血、水肿，肺组织内散在分布大小不等的实变灶，形状不规则，色灰红或灰黄色，可见点状和片状出血，弹性差。见图 22.光镜检查：对照组支气管粘膜上皮完整，肺小叶结构清晰，肺泡腔结构完整，肺泡壁无增厚，肺泡间质无炎性浸润。肺炎组肺泡萎陷，腔内渗出、出血，肺组织结构消失，细支气管及其周围肺泡腔内充满脓性渗出物及少量纤维素。肺泡间隔增宽、断裂，肺泡间隔内血管扩张充血，炎症细胞浸润。见图 2

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 王荷花,韩明哲;NK细胞的免疫生物学特性[J];国外医学.输血及血液学分册;2004年05期

2 魏海明,邬鹏,田志刚;NK细胞识别的新模式——压力诱导模式[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2005年02期

本文编号：2725029