细胞因子基因多态性与肺结核关系的研究

发布时间：2020-07-03 20:59

【摘要】： 研究背景 基因在很大程度上决定了一个个体的表型,包括外貌、体重等一些显而易见的方面。对于某些疾病来说,基因可能影响个体对该种疾病的易感性。这在一些遗传性疾病中就很明显,如家族性高血压、红绿色盲、血友病等。上20世纪70年代,通过以家族研究为基础的连锁分析和以病例-对照研究为基础的相关分析证实个体对结核病易感性的差异部分是由宿主基因决定的。随着研究深入,人们已发现自然抵抗相关(NRAMP1)基因、维生素D受体(VDR)基因、甘露糖结合植物凝集素基因(MBL)等可能与结核病易感性相关。本研究拟进一步探讨在结核分支杆菌感染(MTB)中具重要免疫作用的多种Th1/Th2相关细胞因子的基因多态性与肺结核的关系。 目的 通过病例-对照研究,检测白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、白介素-18(IL-18)、干扰素-γ(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子的基因多态性在肺结核患者及健康人群中的分布状况,分析Th1/Th2细胞因子基因多态性与肺结核易感性的关系。 方法 (1)采用序列特异性引物多聚酶链式反应( PCR - SSP)及基因测序技术对肺结核患者及健康对照者两组人群的细胞因子IL-4、IL-10、IL-18、IFN-γ、TNF-α基因多态性进行检测,并分析其基因型频率、等位基因频率及单倍型频率在两组人群中的分布状况。 (2)通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测样本血清中细胞因子(IL-10)浓度,分析各基因型与细胞因子血清中浓度的关系。 结果 (1)肺结核患者IL-10(-1082)位点A/A纯合子、A/G杂合子、G/G纯合子基因型频率分别为85.4%、13.1%、1.5%;A、G等位基因频率分别为91.9%、8.1%。健康对照者A/A纯合子、A/G杂合子、G/G纯合子基因型频率分别为77.5%、22.0%、0.5%;A、G等位基因频率分别为88.5%、11.5%。两组间基因型分布差别有统计意义(P0.05)。患者组A/A基因型高于对照组,G/A基因型低于对照组(P0.05)。但两组的A、G等位基因频率分布差别没有统计意义。IL-4(-590)位点、IL-18(-607、-137)位点、IFN-γ(+874)位点及TNF-α(-308、-238)位点基因型频率及等位基因频率在肺结核患者和健康对照者中分布无明显差异(P0.05)。 (2)对TNF-α和IL-18两种细胞因子启动子区内的两位点进行单倍型分析。TNF-α两位点各种单倍型在两组间分布没有差异(P0.05)。但肺结核组IL-18启动子区-607、-137多态性位点CC单倍型显著低于对照组(P0.05)。 (3)血清中细胞因子IL-10浓度在两组中均很低,168份样本中仅有12份样本IL-10浓度在检测限之上。其中肺结核组7份,健康对照组5份,平均值分别为30.04pg/ml和5.51pg/ml。 结论 (1)在中国汉族人群中细胞因子IFN-γ(+874)、TNF-α(-308、-238)、IL-4(-590)基因位点单核苷酸多态性(SNP)与肺结核易感性无关。 (2)在中国汉族人群中细胞因子IL-10(-1082)基因单核苷酸多态性(SNP)与肺结核易感性相关。A/A基因型可能是一个肺结核易感的风险因素。 (3)在中国汉族人群中细胞因子IL-18(-607、-137)位点等位基因及基因型多态性与肺结核易感性无关,但CC单倍型可能是肺结核的耐受基因。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R521
【图文】：

弃下液。(9) 加入 Buffer HB500μL 到柱子上，8000rpm 离心 1min，弃下液。(10) 加入 1×DNA Wash Buffer 650μL 到柱子上，8000rpm 离心 1mi（重复一次）。(11) 最大转速度离心 2min，使柱子干燥。(12) 将柱子转移到一新的无核酸酶的 2mL 小 EP 管上，加入 50-100μ预热的洗脱 Buffer，60℃孵育 5min，后 10000rpm 离心 1min，洗脱柱NA（重复离心一次提高产量）。DNA 样品放-20℃保存备用。(13) 电泳: 随机抽取提取的 DNA 样品 6 份，每份吸 6μL 及 2μL 的 Loffer 混匀，加入到含有 Goldview 核酸染料的 0.8 %琼脂糖凝胶中,1×T,80V 恒压电泳 45min,凝胶成像仪下观察结果及拍照（见图 2.4.1）。

对于IL-10(-1082G/A)位点、IL-18(-137G/C)位点及IFN-γ(874 A/T)位点，两条特异性正向引物和通用的反向引物扩增的产物分别是2563bp、 248bp和1414bp，内参正向引物和通用的反向引物扩增996bp的产物（图3.1.1）。第二组,对于IL-18(-607C/A)位点、TNF-α(-308 G/A、-238G/A) 位点，两条特异性正向引物和通用的反向引物扩增的产物分别为721bp、275bp和204bp，内参正向引物和通用的反向引物扩增996bp的产物（图3.1.2）。第三组，对于IL-4(-590C/T)位点，两条特异性正向引物和通用的反向引物扩增458bp的产物，内参正向引物和反向引物扩增366bp的产物（图3.1.3.）。根据PCR-SSP结果选取各种基因型，用测序引物的扩增产物进行测序，分别测出野生型和突变型纯合子和杂合子，与PCR-SSP方法结果一致（图3.1.4）

【参考文献】

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本文编号：2740166