Elafin在胞质内的抗炎机制及对气道黏液高分泌的影响

发布时间：2020-07-04 22:29

【摘要】：目的:探讨Elafin在气道上皮细胞系16HBE胞质内的抗炎机制及其对黏液高分泌的影响和相关的机制方法:(1)体外培养人支气管上皮细胞系16HBE细胞,将已构建好的pEGFP-N1-Elafin载体转染到细胞中,并以空质粒载体作其对照,以外源性肿瘤坏死因子(TNF)-α作为刺激物共同孵育。将细胞分为3组:①空白对照组;②空质粒载体+外源性TNF-α(10μg/L)组;③重组质粒+外源性TNF-α(10μg/L)组。间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜检测细胞核中核因子(NF)-κB的活性,ELISA检测细胞上清液中炎性介质(选取IL-1β、IL-8作为代表)的含量,Western blot检测SUMO-1-p-IκBα含量。(2)给予外源性EGF作为刺激物共同孵育。将细胞分为3组:①空白对照组;②空质粒载体+ EGF(25μg/L)组;③重组质粒+EGF(25μg/L)组。RT-PCR和ELISA分别检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC mRNA水平和MUC5AC含量。间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜检测细胞核中核因子(NF)-κB的活性。Western blot检测SUMO-1-p-IκBα含量。结果:(1)重组质粒组的细胞中NF-κB的活性和IL-1β、IL-8的生成量与空质粒载体组细胞相比明显降低而SUMO-1-p-IκBα的含量则显著高于后者(P㩳0.01)。(2)转染重组质粒的细胞中MUC5AC mRNA水平、MUC5AC的含量(0.36±0.09)以及NF-κB的活性显著低于转染空载体的对照组细胞[MUC5AC的含量(0.55±0.07)](P㩳0.01),而SUMO-1-p-IκBα的含量则显著高于后者(P㩳0.01)。结论:(1)Elafin能够通过促进IκBα的类泛素化阻止NF-κB的活化,下调前炎性介质的生成,从而发挥其抗炎作用。(2) Elafin促进p-IκBα的类泛素化阻止NF-κB的活化,从而下调MUC5AC的生成。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R563.9
【图文】：

活化的

ABC图 1-1 Elafin 对 NF-κB 活化的影响Fig1-1 Effect of Elafin on NF-κB activity innuclearElafin inbits exogenous TNF-α-inducedNF-κB activity（Laser scanning confocalmicroscope,×400）.A.Blank control group;B.Empty plasmid+TNF-α group;C. pEGFP-N1- Elafin +TNF-α group

泛素化,胞质

图 1-2 Elafin 在胞质内对 IL-1β 和 IL-8 生成水平的影响Fig1-2 Effect of Elafin in cytoplasm on IL-1β and IL-8 productionElafin down-regulation of exogenous TNF-α-induced IL-1β and IL-8 productA.Blank control group; B. Empty plasmid+ TNF-α group; C. pEGFP-N1+TNF-α group050100150200A B CIL-IL-

【参考文献】