趋化因子受体7对肺上皮损伤及肺上皮间质转分化的抑制作用

发布时间：2020-07-08 07:00

【摘要】：背景急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)是一种急性弥漫性肺部炎性反应,可导致肺血管的通透性增加,肺泡水肿及透明膜形成,肺重量增加。目前,ARDS仍然是影响人类健康的重大疾病,虽在治疗上有一定突破,中重症ARDS患者的病死率仍在40%以上。其中,肺纤维化可能是影响ARDS患者死亡率的重要因素。ARDS相关性肺纤维化与多种因素相关,其中目前广泛应用的机械通气可能会加重肺损伤使肺纤维化发生,酸误吸也能引起吸入性肺炎从而引起肺纤维化。酸误吸加重炎症反应,研究表明酸吸入能损伤肺上皮引起肺上皮间质转分化,后者为纤维化的重要机制。上皮间质转分化是成熟分化的上皮细胞失去细胞形态、极性及粘附能力获得间质细胞表型的过程,EMT可加速细胞外基质(ECM)的形成,是肝、肾、肺及其他脏器纤维化的重要机制.趋化因子受体7(CXCR7)能改变细胞外基质,促进细胞再生,调控炎症及免疫细胞转运。在小鼠模型中,CXCR7能抑制肺纤维化,并改善肺上皮损伤,机制未明。本研究我们以人肺上皮细胞为主要研究对象,通过体外实验研究盐酸导致人肺上皮细胞间质转分化中CXCR7的抑制作用,探讨ARDS酸误吸中的肺修复和重塑机制。目的研究CXCR7在盐酸诱导的人肺上皮细胞中的表达及CXCR7对人肺上皮细胞间质转分化的抑制作用,为阐明肺上皮在肺纤维化中的发病机理提供分子理论依据及为肺纤维化的诊治提供新的治疗靶分子。方法分别采用盐酸培养基及单纯培养基预处理BEAS-2B细胞30分钟,随后平行观察至48h。倒置显微镜下观察细胞的形态变化,应用定量聚合酶链反应(qPCR)检测炎症因子IL-6,IL-8;应用蛋白质印迹法(Western Blot)检测盐酸处理后EMT的蛋白标志物:E-钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞角蛋白-8(Cytokeratin-8,CK-8)、表面活性蛋白B(SP-B)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及CXCR7的表达情况。同等条件下加入应用CXCR7激动剂TC14012观察TC14012处理前后的炎症因子及EMT蛋白标志物表达情况。结果1.盐酸培养基30分钟预处理人肺上皮细胞发生上皮间质转分化,表现为:细胞形态由卵圆形变为长梭形,细胞间隙增大;上皮标志物E-cadherin、CK-8、SPB蛋白表达下降,间质标志物N-cadherin、Vimentin、α-SMA蛋白表达增高、炎症因子IL-6,IL-8表达增高。2.盐酸培养基30分钟预处理使CXCR7的表达下降。3.TC14012可部分逆转盐酸培养基30分钟预处理对炎症因子的升高,也可部分逆转其对EMT蛋白标志物中上皮标志物的表达降低及间质标志物的表达增高。结论盐酸预处理使人肺上皮细胞炎症因子升高,发生EMT并下调CXCR7的表达。CXCR7激动剂TC14012使CXCR7表达升高,并有使EMT减轻的趋势。CXCR7可能是ARDS相关肺纤维化新的重要发病机制和潜在治疗目标。
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R563
【图文】：

第四章 结果部分：盐酸诱导人肺上皮细胞 BEAS-2B 间质转分化型的建立盐酸对人肺上皮细胞 BEAS-2B 细胞形态学的影响盐酸培养基及单纯培养基处理细胞 30 分钟后换成完全培养基，实验分组及盐酸组。观察镜下结果，倒置显微镜下可见 BEAS-2B 细胞在对照鹅卵圆形，细胞紧密相连，细胞间极性存在；而在盐酸组，刺激后 6 小胞出现长梭形，刺激后 24 小时可观察到大部分细胞呈长梭形，显间隙，极性消失，部分细胞不再贴壁而悬浮于培养基中。

图 1.2 对照组与盐酸组 24 小时细胞毒性比例统计分析图，n=4 盐酸诱导人肺上皮细胞 BEAS-2B 模型中炎症因子 IL-6，IL表达上调为了模型中炎症反应的情况，采用 q-PCR 法检测炎症因子 IL-6 及 IL-8NA 表达水平。结果显示：盐酸诱导 1 小时后，IL-6 及 IL-8 的 mRNA 表达照组均上调，因此可以认为盐酸诱导人肺上皮细胞 BEAS-2B 模型引起细损伤。

图 1.2 对照组与盐酸组 24 小时细胞毒性比例统计分析图，n=41.3 盐酸诱导人肺上皮细胞 BEAS-2B 模型中炎症因子 IL-6，IL-8表达上调为了模型中炎症反应的情况，采用 q-PCR 法检测炎症因子 IL-6 及 IL-8 的mRNA 表达水平。结果显示：盐酸诱导 1 小时后，IL-6 及 IL-8 的 mRNA 表达对比对照组均上调，因此可以认为盐酸诱导人肺上皮细胞 BEAS-2B 模型引起细胞炎症损伤。

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本文编号：2746237