我国不同产地温石棉及代用纤维对中国仓鼠肺细胞p73和p53基因表达的影响

发布时间：2020-07-11 17:04

【摘要】：目的：通过中国四大产区(青海芒崖、四川新康、甘肃阿克塞、陕南)温石棉及四种代用纤维(玻璃纤维、陶瓷纤维、硅灰石、岩棉)作用于中国仓鼠肺细胞(Chinese Hamster Lung Cell,V79细胞),探讨粉尘对细胞的毒性作用以及比较温石棉及代用纤维之间的毒性差异,和p73基因和p53基因在粉尘导致的细胞损伤中的表达及两者间的相互关系。方法：选取四大产区温石棉及四种代用纤维共八种设立25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml五种浓度的粉尘悬液分别作用于V79细胞,另设空白对照组,染毒24小时后用活细胞计数试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)检测细胞增殖情况,比较各组细胞存活率。选择50μg/ml这一浓度作用于V79细胞24小时,每种粉尘设立三个平行对照组,另设立一个空白对照组。瑞氏-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色观察细胞形态；用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测p73基因和p53基因的表达。结果：(1)瑞氏-吉姆萨染色结果：多数温石棉和代用纤维组可发现裸核、空泡以及黑褐色颗粒沉着现象。(2)细胞存活率：不同浓度的粉尘作用于V79细胞24小时后,多数以50μg/ml时细胞增殖最快,多数温石棉组的细胞出现成倍增长,且温石棉组的增殖普遍大于代用纤维组。(3)实时荧光定量PCR (real-time quatitat ive polymerase chain reaction,real-time Q-PCR)检测p73基因和p53基因。1)p73基因：阿克塞组、玻璃纤维组、岩棉组、陕南组p73与空白对照组分别比较可以得出,阿克塞组、玻璃纤维组、岩棉组、陕南组的表达量明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。而青海芒崖组、四川新康组、陶瓷纤维组、硅灰石组分别与空白对照组对比,差异无统计学意义(P0.05)。其余纤维组间两两对比差异均无统计学意义(P0.05)。2)p53基因：空白对照组与各个粉尘组及各纤维组间相比,差异均无统计学意义(P0.05)。3)p53基因与p73基因相关性检验无统计学意义(P0.05)。结论：(1)多数温石棉组和代用纤维组出现细胞中毒现象。(2)p73基因在阿克塞组、玻璃纤维组、岩棉组和陕南组的表达明显高于空白对照组,提示这几组温石棉及代用纤维可能导致细胞恶性改变,p73基因是通过上调其表达,在导致细胞恶性改变中可能发挥癌基因的作用。阿克塞组、玻璃纤维组、岩棉组和陕南组导致癌变的可能性更大,而其他纤维组导致癌变的可能性却不明确。(3)p53在各组中的表达无明显差异,p53在粉尘所致的细胞恶性改变中的作用不明确。
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R563.9
【图文】：

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图2一3RNA电泳图FigZ一 3RNAeleetroPhoresisimages2.5.6逆转录成cDNA提取细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。采用MBI公司的 RevertAidTMFristStrandcDNASynthesisKit，在PCR仪上进行扩增，条件如下:(l)在冰上预混下列溶液: totalRNAS林l randomhexamerPrimer(0.2拼g/林l)l协l deionizedwater， nueleasefree6林l，‘1，1..‘1..

本文编号：2750684