害嗜鳞螨Ⅱ类变应原Lep d2特异性免疫治疗效果分析

发布时间：2020-07-18 14:14

【摘要】：目的:克隆害嗜鳞螨2类变应原Lep d2全长基因,构建其原核表达载体并表达纯化,以此为疫苗对过敏性哮喘小鼠模型进行特异性免疫治疗并评价其治疗效果。方法:根据Genbank公布的Lep d2全长核苷酸序列(AY288150.1)合成Lep d2全长基因,将其插入到表达载体p ET28a(+)质粒中,得到重组质粒p ET28a(+)-Lep d2。重组质粒经限制性内切酶双酶切鉴定后,转化大肠杆菌Rosetta菌株中。用IPTG诱导表达,筛选出最适表达条件(IPTG浓度、温度、时间)后对重组蛋白进行大规模表达、纯化和浓缩。用尘螨提取液致敏BALB/c小鼠建立急性哮喘小鼠模型,用制备的重组蛋白Lep d2对哮喘小鼠进行特异性免疫治疗,观察小鼠症状及肺组织病理变化,并以酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BALF和脾细胞培养液上清中细胞因子IL-5、IL-13、IFN-γ的水平及血清中特异性Ig E(s Ig E)、s Ig G2a抗体水平。结果:双酶切鉴定结果显示:成功构建了重组质粒p ET28a(+)-Lep d2,菌落PCR结果说明:重组质粒成功转化Rosetta(DE3),用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE电泳和Western blot分析结果表明:成功表达并纯化了重组变应原Lep d2。哮喘小鼠经变应原Lep d2特异性免疫治疗后,小鼠血清中s Ig E抗体水平较哮喘组明显降低(P0.01);血清中s Ig G2a抗体水平较哮喘组显著增高(P0.01),Lep d2治疗组BALF和脾细胞培养液上清中IFN-γ浓度均高于哮喘组升高(P0.01)。而Lep d2组BALF和脾细胞培养液上清中IL-5和IL-13则低于哮喘组(P0.01)。说明害嗜鳞螨Ⅱ类变应原Lep d2疫苗可对哮喘小鼠进行有效SIT。结论:害嗜鳞螨Ⅱ类变应原Lep d2大规模原核表达成功,且害嗜鳞螨Ⅱ类变应原Lep d2疫苗可有效控制小鼠过敏症状并减轻气道炎症。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25

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