过表达SOCS1的DCs干预COPD小鼠肺组织中Th17及Treg相关细胞因子的变化及意义

发布时间：2020-07-28 17:40

【摘要】：目的:探讨过表达SOCS1的DCs(dendritic cells overexpressing suppressor of cytokine signaling-1,DC-SOCS1)经Th17/Treg相关细胞因子途径在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)发病机制中的可能作用及意义。方法:从小鼠股骨及胫骨中提取DCs前体细胞并以IL-4、GM-CSF刺激,诱导形成骨髓源性未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,im DCs)。用过表达SOCS1的慢病毒感染imDCs,获得DC-SOCS1目的细胞。Western blot检测DC-SOCS1中SOCS1的表达。将DC-SOCS1(1×10~6)、DC-SOCS1(2×10~6)、im DCs(1×10~6)在COPD烟熏建模的第1天、第7天通过尾静脉过继免疫至小鼠体内,以回输生理盐水为对照组。各组小鼠均继续烟熏建模至28天取肺组织。ELISA检测肺组织中Th17相关细胞因子IL-17和IL-23及Treg相关细胞因子IL-10和TGF-β的变化。结果:1.成功提取、培养及鉴定小鼠骨髓源性DCs;2.成功构建DC-SOCS1;3.COPD小鼠肺组织IL-17和IL-23的结果:(1)回输不同的DCs(imDCs和不同浓度的DC-SOCS1),使COPD小鼠肺组织中IL-17和IL-23的表达减少,差异有统计学意义(P0.05)。回输高浓度DC-SOCS1(2×10~6)相较于低浓度DC-SOCS1(1×10~6),IL-17和IL-23的表达减少,差异有统计学意义(P0.05)。(2)在第1天回输后各组间IL-17和IL-23的水平较第7天回输后表达减少,差异有统计学意义(P0.05)。(3)第1天回输DC-SOCS1(2×10~6)使细胞因子IL-17和IL-23产生最少。4.COPD小鼠肺组织IL-10和TGF-β的结果:(1)回输不同的DCs(imDCs和不同浓度的DC-SOCS1)干预后,COPD小鼠肺组织中IL-10和TGF-β的表达增加,差异有统计学意义(P0.05)。回输高浓度DC-SOCS1(2×10~6)相较于低浓度DC-SOCS1(1×10~6),IL-10和TGF-β的表达增加,差异有统计学意义(P0.05)。(2)在第1天回输后各组间IL-10和TGF-β的水平较第7天回输后增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论:(1)imDCs及不同浓度的DC-SOCS1于不同时间干预COPD小鼠,均能减少肺组织中Th17相关促炎性细胞因子IL-17和IL-23的表达,且早期高浓度的DC-SOCS1效果显著,可能减轻COPD的炎症反应,进而在COPD治疗中发挥重要作用。(2)imDCs及不同浓度的DC-SOCS1于不同时间干预COPD小鼠,均能增加肺组织Treg相关抗炎及抑制性细胞因子IL-10和TGF-β的表达,且早期高浓度的DC-SOCS1效果显著,可能增强COPD的抗炎作用或诱导免疫耐受,在COPD中起重要的防治作用。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R563.9
【图文】：

图 1 骨髓源性 DCs 的提取注：A：取 C57BL/6 小鼠，颈椎脱臼处死，消毒；B：剔除肌肉取股骨、胫骨；C、D：去除骨骺端，用 PBS 冲洗出骨髓；E：将冲洗出来的骨髓液吸入离心管，1000rpm 离心 5min，弃去上清并固定；F：缓慢将细胞悬液加入预先装有 5mL 淋巴细胞分离液的 15mL 离心管内，1000rpm 离心 20min，离心后溶液分 5 层，吸取中间骨髓基质细胞层（白膜层），PBS 洗 3 次。后以 106/mL 细胞浓度接种于含 10%胎牛血清及青链霉素的 DCs 生长培养基于6 孔板中，置 37℃、5%CO2恒温培养箱中培养。每天观察细胞生长状态，细胞约 1-2d 贴壁，培养第 7 天加入 LPS（100ng/ul）诱导成熟。

图 2 pLVX- SOCS1-IRES-ZsGreen1 过表达质粒构建因慢病毒包装纯化 慢病毒载体、包装细胞和菌株病毒载体系统毒包装系统为四质粒系统，组成为 pLVX-IRES-ZsGreenEV，PG-P3-RRE。其中 pLVX-IRES-ZsGreen1 能表达绿色SVG，PG-P2-REV，PG-P3-RRE 含有病毒包装所必须的元胞株T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培S)。贴壁细胞经培养生长增殖形成单层细胞。株肠杆菌菌株 DH5α，作为扩增慢病毒载体和辅助包装载体

图 5 COPD 模型制备2.6.3.3 差异化处理B：NS 回输（0.1ml/10g）（烟熏第 1 天注射）C：DC-SOCS1 I 组 1×106回输（0.1ml/10g）（烟熏第 1 天注射）D：DC-SOCS1 II 组 2×106回输（0.1ml/10g）（烟熏第 1 天注射）E：imDCs 1×106回输（0.1ml/10g）（烟熏第 1 天注射）F：DC-SOCS1 III 组 1×106回输（0.1ml/10g）（烟熏第 7 天注射）G：DC-SOCS1 IV 组 2×106回输（0.1ml/10g）（烟熏第 7 天注射）H：imDCs1×106回输（0.1ml/10g）（烟熏第 7 天注射）

【参考文献】

相关期刊论文 前7条

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本文编号：2773227