兔VX2恶性胸腔积液模型的建立及凝血酶、滑石粉对恶性胸腔积液治疗机制的研究

发布时间：2020-08-03 18:44

【摘要】：目的：恶性胸腔积液（Malignant pleural effusion，MPE）是指恶性肿瘤转移至胸膜或胸膜原发肿瘤所致的胸腔积液。MPE的产生往往标志着病情已进入晚期，大多没有手术机会。治疗的目的是减少积液的产生，提高生存质量，尽量延长患者的生存期。目前多采用小口径胸腔引流管引流积液，并向胸腔内注入药物行胸膜固定。应用凝血酶、滑石粉作为胸腔粘连剂治疗胸腔积液由来已久，但其治疗机制及粘连效果尚不完全明确。本研究旨在通过向兔胸腔内注入VX2（一种由shope病毒所诱发的乳头瘤衍生的鳞癌）组织悬液建立MPE模型，给予凝血酶、滑石粉治疗MPE，以此研究和探讨凝血酶、滑石粉在治疗MPE中的治疗机制。方法：选取健康新西兰白兔（8-10月龄，雌雄各半，体重3kg左右）给予右侧胸腔内注入VX2组织悬液1.5ml，经B超定位有胸腔积液产生（10ml），抽取积液行脱落细胞学检查，找到癌细胞后，即证实为MPE模型成功。随机把MPE模型分为4组，为凝血酶低剂量组（10只）、凝血酶高剂量组（10只）、滑石粉组（10只）和对照组（6只）。所有MPE模型均置小口径胸腔引流管，用注射器抽尽积液，并记录引流量。然后分别向胸腔注入药物：凝血酶低剂量组给予200iu/kg的凝血酶溶液，凝血酶高剂量组给予400iu/kg的凝血酶溶液；滑石粉组给予100mg/kg的滑石粉混悬液（10%滑石粉混悬液）；对照组给予等量生理盐水。分别在注药当天和注药后48小时抽取胸腔积液做生化指标检测（包括葡萄糖、乳酸脱氢酶），并通过双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）检测积液中纤溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）、血管内皮生长因子（VEGF）的含量，并观察引流液颜色和量的变化。实验期间，实验动物统一管理，饲养。待实验兔死亡后，打开胸腔，观察并进行各组胸腔粘连评分；取壁层胸膜组织做HE染色，用于镜下观察，测量胸膜厚度。结果： 1滑石粉组中有2只胸腔注药后出现呼吸急促，鼻翼煽动，短时间内死亡。凝血酶低剂量组中有10只、凝血酶高剂量组中有10只、滑石粉组中有8只和对照组中有6只顺利完成实验。 2复制MPE模型最短时间11天，最长时间23天，平均造模时间（17.10±2.79）天。 3胸腔注药后的存活时间，凝血酶低剂量组（3.90±0.74）天、凝血酶高剂量组（6.90±1.20）天、滑石粉组（7.10±1.20）天,对照组（3.30±0.67）天；不同组间，凝血酶低剂量组和凝血酶高剂量组比较（P=0.000）、凝血酶低剂量组和滑石粉组比较（P=0.000）、凝血酶高剂量组和对照组比较（P=0.000）、滑石粉组和对照组比较(P=0.000)均有显著性差异。 4MPE模型中引流液颜色随病情进展，有淡血性→血性→暗血性的变化趋势。经凝血酶、滑石粉治疗后引流液颜色可变为淡血性或淡黄色。 5胸腔注药后，积液引流量为凝血酶低剂量组(30.00±12.00)ml、凝血酶高剂量组(28.17±4.40)ml、滑石粉组(26.00±10.33)ml、对照组(49.67±7.53)ml；不同组间，凝血酶高剂量组和对照组比较（P=0.004）、滑石粉组和对照组比较（P=0.006）均有显著性差异。 6胸腔引流液的生化特征 6.1葡萄糖（GLU）比较同一组治疗前后，凝血酶低剂量组（P=0.000）、凝血酶高剂量组（P=0.005）、滑石粉组（P=0.012）、对照组（P=0.001）中葡萄糖较治疗前有下降趋势,有显著性差异。不同组间治疗前后葡萄糖含量，凝血酶高剂量组和对照组比较（P=0.007）、滑石粉组和对照组比较（P=0.003）均有显著性差异。 6.2乳酸脱氢酶（LDH）比较同一组治疗前后，凝血酶低剂量组（P=0.000）、凝血酶高剂量组（P=0.031）、滑石粉组（P=0.000）、对照组（P=0.000）中乳酸脱氢酶较治疗前有增高趋势，有显著性差异。不同组间治疗前后乳酸脱氢酶含量，凝血酶高剂量组和对照组比较（P=0.006）、滑石粉组和对照组比较（P=0.004）、凝血酶低剂量组和滑石粉组比较（P=0.006）均有显著性差异。 7胸腔引流液的细胞因子含量 7.1PAI-1水平比较同一组治疗前后，凝血酶低剂量组（P=0.007）、凝血酶高剂量组（P=0.008）、滑石粉组（P=0.009）中PAI-1水平较治疗前升高，有显著性差异。对照组（P=0.956）中治疗前后无显著性差异。不同组间治疗前后PAI-1水平，凝血酶高剂量组和对照组比较（P=0.005）、滑石粉组和对照组比较（P=0.007）有显著性差异。 7.2VEGF水平比较同一组治疗前后，凝血酶低剂量组（P=0.453）、凝血酶高剂量组（P=0.388）、滑石粉组（P=0.802）、对照组（P=0.133）中VEGF水平无显著性差异。不同组间治疗前后VEGF水平，凝血酶低、高剂量组，滑石粉组、对照组之间比较，无显著性差异（x=1066，df=3，P=0.785）。 8胸腔粘连积分，凝血酶低剂量组、凝血酶高剂量组、滑石粉组分别和对照组比较，有显著性差异（P=0.000）；凝血酶低剂量组和凝血酶高剂量组比较（P=0.000）、凝血酶低剂量组和滑石粉组比较（P=0.000）有显著性差异。 9胸膜病理观察 9.1镜下所见对照组中壁层胸膜纤薄，结缔组织中无炎细胞浸润和成纤维细胞增生；凝血酶低剂量组中壁层胸膜稍增厚，结缔组织中多量淋巴细胞浸润及成纤维细胞增生；凝血酶高剂量组中壁层胸膜明显增厚，大量毛细血管和成纤维细胞增生及坏死；滑石粉组中壁层胸膜明显增厚，大量毛细血管及成纤维细胞增生并包绕肿瘤组织。 9.2胸膜厚度在高倍镜下测量壁层胸膜厚度，凝血酶低剂量组为（0.308±0.016）mm、凝血酶高剂量组为（0.744±0.007）mm、滑石粉组为（1.508±0.043）mm、对照组为（0.107±0.058）mm。不同组间两两比较均有显著性差异（P=0.004）。结论： 1VX2组织悬液法可短期内复制MPE兔模型，方法简单、成型率高。 2胸腔内应用凝血酶，使壁层胸膜增厚；通过减少纤溶酶原的激活使纤维蛋白沉积；刺激胸膜成纤维细胞增多，加速胸腔闭合；对降低VEGF无明显作用。400iu/kg的凝血酶溶液治疗MPE，安全有效，未见明显副作用。 3胸腔内应用滑石粉，使壁层胸膜明显增厚；可抑制纤溶酶原的激活，减少纤维蛋白分解，促进胸腔粘连；成纤维细胞增多，加速纤维化；对降低VEGF无明显作用。10%滑石粉混悬液治疗效果肯定，但副作用明显，可引起部分MPE模型猝死。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R561.3;R-332

【参考文献】