SEC3对中性粒细胞弹性蛋白酶诱导气道上皮细胞黏蛋白分泌的影响
发布时间：2017-03-30 22:04
本文关键词：SEC3对中性粒细胞弹性蛋白酶诱导气道上皮细胞黏蛋白分泌的影响，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的： 探讨栓链因子复合物亚基Sec3对中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）诱导的气道上皮细胞黏蛋白分泌的影响。 方法： 1、体外培养人气道上皮细胞16HBE，随机分为8组： A组：空白对照组； B组：AG1487（表皮生长因子受体磷酸化抑制剂）组； C组：Sec3siRNA组； D组：阴性siRNA对照组； E组：NE组； F组：NE+AG1478； G组：NE+Sec3siRNA组； H组：NE+阴性siRNA组； 2、以中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）作为刺激因素，构建黏液高分泌模型，分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、逆转录-聚合酶链反应（rt-PCR）分析受刺激组和对照组MUC5AC的转录和分泌水平，Western印迹法分析磷酸化表皮生长因子受体（p-EGFR）水平。 3、以AG1487作为抑制，阻遏表皮生长因子受体信号通路，采用Western-blot法检测抑制组和对照组磷酸化EGFR水平，验证AG1487的抑制效应，并分析比较抑制组和对照组黏蛋白的表达情况。 4、用Sec3-siRNA-pLKO.1lentiviral载体转染Sec3siRNA，以抑制Sec3功能，，采用Western-blot法检测转染组和对照组Sec3水平，确认其转染成功后，分析转染组和对照组在中性粒细胞弹性蛋白酶刺激下，MUC5AC转录和胞外分泌水平的变化。 结果： 1、中性粒细胞弹性蛋白酶刺激下，MUC5AC的转录（E组：0.75±0.05）和胞外分泌水平(E组：0.80±0.09)显著提高，（p㩳0.01），相应，表皮生长因子受体的磷酸化水平（E组：0.87±0.12）也明显增加（p㩳0.01）。 2、加入表皮生长因子受体磷酸化抑制剂后，p-EGFR水平下降（F组：0.13±0.06）（p㩳0.01），中性粒细胞弹性蛋白酶的刺激作用受到抑制，MUC5AC转录水平(F组：0.38±0.06)较未受抑制组(E组：0.75±0.05)显著下降（p㩳0.01），分泌水平（F组：0.32±0.08）也随之降低（p㩳0.01）。 3、转染Sec3siRNA后，随着Sec3蛋白表达的下降（G组：0.11±0.06）（p㩳0.01），MUC5AC的胞外分泌水平（G组：0.36±0.09）也显著降低（p㩳0.01），但其转录水平（G组：0.72±0.04）并未受到影响（p㧐0.05）。 结论： 在NE诱导的人气道上皮细胞黏液高分泌过程中，EGFR是介导MUC5AC合成的主要信号通路，栓链因子复合物亚基Sec3则对黏蛋白出胞分泌有重要的介导作用。
【关键词】：黏蛋白类 中性粒细胞弹性蛋白酶 栓链因子复合物 表皮生长因子受体
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563
【目录】：
- 英汉缩略语名词对照5-8
- 中文摘要8-11
- ABSTRACT11-14
- 前言14-16
- 1 材料与方法16-24
- 1.1 材料16-17
- 1.2 方法17-24
- 1.3 统计学处理24
- 2 结果24-28
- 2.1 各组细胞增殖活力的比较24-25
- 2.2 Western-blot 法检测 16HBE 细胞转染情况25
- 2.3 各组细胞 EGFR 磷酸化水平的比较25-26
- 2.4 NE 和 EGFR 磷酸化抑制剂对 MUC5AC 表达的影响26-27
- 2.5 转染 Sec3 siRNA 对 16HBE 细胞 MUC5AC 表达及分泌的影响27-28
- 3 讨论28-30
- 全文总结30-31
- 参考文献31-33
- 文献综述: Exocyst 复合物参与胞吐作用的研究进展33-44
- 参考文献40-44
- 致谢44-45
- 攻读硕士学位期间完成的论文45-46
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 李琪;周向东;;中性粒细胞弹力蛋白酶引起黏蛋白5AC高表达的信号转导机制[J];中华医学杂志;2007年05期
本文关键词：SEC3对中性粒细胞弹性蛋白酶诱导气道上皮细胞黏蛋白分泌的影响，由笔耕文化传播整理发布。
本文编号：278167
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