胆碱能抗炎通路在急性肺损伤小鼠中的保护作用

发布时间：2020-08-06 17:06

【摘要】：目的通过对胆碱能抗炎通路标志性蛋白IκB、p-IkB、NF-κBp65在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠模型中的表达变化及小鼠生存率的研究,探索该通路是否对ALI有保护作用。方法实验选择SPF级雄性BALB/c小鼠,体重20-22g。将小鼠随机分为4组,分别是空白对照组(C),脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(L),LPS+nicotine组(LN)和 LPS+甲基牛扁亭(methyllycaconitine)组(LM),每组 10 只(n=10)。通过腹腔注射LPS建立小鼠急性肺损伤模型。L组小鼠称重后仅腹腔注射LPS(10 mg/kg)。LN组和LM组小鼠在腹腔注射LPS前30min,腹腔分别注射nicotine(1.2 mg/kg)和methyllycaconitine(2.4 mg/kg)。C组小鼠仅腹腔注射相同容量的生理盐水。各组小鼠均在LPS注射完成后6h取材。应用4%水合氯醛(1 ml/100 g)腹腔注射麻醉小鼠,眼球取血离心获取上清,Elisa法检测血清中主要炎性因子IL-6、TNF-α的表达。之后打开胸腔,暴露心脏和肺组织,结扎左肺门,取左肺新鲜肺组织,一部分通过称量肺组织湿重和干重计算其比值,了解肺组织水肿程度;剩余部分用Western Blot法检测ALI发生过程中胆碱能抗炎通路的下游标志性蛋白IκB、p-IκB、NF-kBp65的表达。右肺用4℃的多聚甲醛溶液(4%)灌注固定,石蜡包埋后切片,HE染色法观察肺组织形态病理学变化;组织免疫荧光观察胆碱能抗炎通路中NF-κB p65蛋白的核内转移情况。结果Elisa法检测各组血清炎性因子水平数据显示,IL-6和TNF-α表达结果呈现相同趋势。与C组相比,L组和LM组小鼠血清IL-6、TNF-α表达量增加显著(p0.01);与L组相比,LN组IL-6、TNF-α的表达量明显减少(p0.01)。各组肺组织干湿比的结果比较,与C组相比,L组W/D显著增加(p0.05),LM组W/D也明显增加(p0.05),表明水肿程度严重。与L组相比,LN组W/D明显降低(p0.05),水肿程度有明显改善。Western blot结果显示,相比较C组,L组和LM组p-IκB的总蛋白表达量增加明显(p0.05);与L组相比,LN组p-IkB的总蛋白表达显著下降(p0.05)。IκB的总蛋白表达量与p-IκB呈现相反趋势。与C组相比,L组和LM组中NF-kB p65的核内表达显著增加(p0.05);与L组相比,LN组NF-κBp65核内表达量明显下降(p0.05)。与C组相比,L组和LM组NF-κBp65在胞浆中的表达显著下调(p0.05);与L组相比,LN组NF-kB p65胞浆内表达量明显上调(p0.05)。HE染色结果显示,C组为正常的肺组织结构;与C组相比,L组和LM组肺组织结构破坏明显,肺组织水肿严重,且有大量炎症细胞浸润;与L组相比,LN组肺组织破坏程度明显改善。免疫荧光结果显示,C组肺组织结构正常,核质清晰;与C组相比,L组和LM组NF-κB p65荧光抗体与细胞核明显大量重叠且肺组织结构破坏明显;与L组相比,LN组NF-kBp65荧光抗体与细胞核重叠现象几乎消失,核质相对清晰。结论在本实验条件下,可以得出如下结论:1.胆碱能抗炎通路的激活对LPS诱导的小鼠ALI有保护作用。2.胆碱能抗炎通路通过降低下游蛋白IkB的磷酸化和减少NF-κB p65的核转移发挥肺保护作用。
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R563

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