白介素-4对哮喘大鼠T淋巴细胞磷脂酰激醇-3激酶表达变化的影响

发布时间：2020-09-09 08:40

　　目的支气管哮喘是一组伴有气道炎症和气道阻塞的复杂疾病,现已公认有多种炎性细胞和炎性介质参与其中,这种气道慢性炎症又导致了气道反应性的增加,这两者被广泛认为是支气管哮喘的基本特征。在气道慢性炎症的发生、发展与持续的过程中,T细胞又被认为是关键性因素,因此,研究T细胞在支气管哮喘发病过程中的作用已成为当前研究的热点。在T细胞的分化、活化、增殖、存活与抗凋亡等一系列细胞效应过程中,多种信号转导途径参与其中,主要包括Ras/MAPK途径、PLC-γ途径、PI3K/Akt途径、PKC/NF-κB途径、JAK/STAT途径等等。这些信号转导途径彼此之间又存在这样或那样的联系,从而共同影响了T细胞的一系列细胞效应,并且不同的信号转导途径在不同的T细胞亚型也有着不同的作用。磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)是细胞内信号转导途径中的一种关键酶,是T细胞最为重要的信号转导途径之一,与T细胞的增殖、分化、活化和抗病毒能力等密切相关,其功能主要表现为与CD28协同刺激信号一道促进T细胞活化;调节周期蛋白和促T细胞增殖因子等表达使T细胞周期正常进行;通过调控凋亡信号转导相关激酶活性和凋亡调控因子表达以拮抗P53、Fas等诱导的T细胞凋亡以及增强T细胞的抗病毒能力等等。已有报道证实PI3K信号转导途径对Th2细胞亚型的活化、细胞因子的合成与分泌、细胞生存与抗凋亡具有重要作用。有研究显示PI3K途径介导了生理情况下IL-4受体所诱导的T细胞的增殖,而且在B细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、髓样祖细胞中,IL-4都表现出对PI3K活性以及该通路的影响,从而促进了细胞的增殖与生存。在哮喘T细胞中,IL-4是否也通过对PI3K通路的影响,从而影响了T细胞的增殖目前尚不清楚。我们通过对IL-4处理的不同组之间的T细胞PI3K的表达的研究,探讨哮喘T细胞中IL-4对PI3K的影响。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常组和哮喘组,每组各20只。哮喘模型的制作按我们实验室以往成熟的方法进行。大鼠于末次激发6小时后行下腔静脉穿刺无菌采血并分离出T细胞。体外培养8小时后,将正常细胞分为1)正常对照组(A组)、2)正常+IL-4组(B组),哮喘组细胞分为1)哮喘组(C组)、2)哮喘+IL-4组(D组)、3)哮喘+IL-4+IL-4抑制剂组(E组),分别按设计要求加入相应的试剂,继续5%CO2、370C培养箱内培养48小时。然后培养细胞应用Westernblotting法检测PI3K的表达。在凝胶成像分析系统上行摄像分析并计算出A值(即检测蛋白灰度值与β-action灰度值的比值)用SPSS12.0统计软件对数据进行统计分析,多重组数比较之间差异显著性检验采用F检验,其中两两组间比较采用q检验。以p0.05为统计学上差异有显著性。结果结果表明正常+IL-4组与正常对照组相比PI3K的表达无显著差异性(P0.05)。哮喘大鼠T细胞中的PI3K的表达上调,明显高于正常对照组,差异有显著性(P0.05)。哮喘组与哮喘+IL-4组之间以及哮喘+IL-4+抗IL-4α抗体之间也具有明显的差异性(P均0.05),其中哮喘+IL-4组的T细胞中的PI3K的表达最为明显,而哮喘组与哮喘+IL-4+IL-4α抗体组之间T细胞中的PI3K的表达没有显著差异性(P0.05),哮喘+IL-4与哮喘+IL-4+IL-4α抗体组之间比较差异有显著性(P0.05)。结论正常大鼠组与正常大鼠+IL-4组之间未见明显的差异显著性,提示IL-4对T细胞的作用可能通过多方面的途径实现,不仅仅通过PI3K信号转导途径,因此在正常T细胞中它的单独作用并未使得PI3K的表达出现明显上调,它的作用可能需要其他因素和信号途径的共同作用才能显现。哮喘组与哮喘+IL-4组之间有明显的差异性,其中哮喘+IL-4组的T细胞内PI3K的表达明显上调,这可能是由于哮喘大鼠的T细胞经过相当长一段时间的刺激,胞内各种因素导致了PI3K的表达增加,其中可能也包括IL-4等细胞因子的作用。与之相对照的是哮喘+IL-4+抑制剂组与哮喘组之间T细胞内PI3K的表达没有差异的显著性,提示IL-4抑制剂可以抑制IL-4对PI3K的作用,进一步说明了IL-4对PI3K的表达有增强的作用。综上所述,我们的实验研究显示,PI3K在哮喘T细胞内的表达有明显的上调,同时IL-4对这种上调有着一定的加强作用,至于IL-4对PI3K的作用是通过哪些具体的环节还有待进一步的研究。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2007
【中图分类】：R562.25

【参考文献】